腸球菌對氟喹諾酮類藥物的敏感性與耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的:檢測腸球菌臨床株在各類標(biāo)本中的分布及對6種氟喹諾酮類藥物的敏感性，為臨床合理使用抗菌藥和控制腸球菌感染提供指導(dǎo)；研究腸球菌Ⅱ型拓?fù)洚悩?gòu)酶基因突變與對氟喹諾酮類藥物耐藥性的關(guān)系，并探討腸球菌中是否存在主動外排系統(tǒng)，以了解腸球菌對氟喹諾酮類藥物的耐藥機(jī)制。 方法:應(yīng)用二倍瓊脂稀釋法檢測78株腸球菌臨床株對6種氟喹諾酮類藥物的敏感性；根據(jù)NCCLS標(biāo)準(zhǔn)，篩選出環(huán)丙沙星耐藥株，PCR擴(kuò)增其gyrA、gyrB、parC和parE基因

2、的喹諾酮耐藥決定區(qū)(QRDR)，并與標(biāo)準(zhǔn)敏感株核苷酸序列進(jìn)行比較，分析基因突變與耐藥的相關(guān)性；應(yīng)用熒光法檢測腸球菌耐藥株和敏感株對環(huán)丙沙星的吸收量以及加入利血平后對環(huán)丙沙星吸收量的變化情況。 結(jié)果:78株腸球菌菌株中，糞腸球菌61株，占78.2％，屎腸球菌15株，占19.2％，其他腸球菌2株，占2.6％；腸球菌主要分離于尿液(61.6％)、傷口分泌物(25.6％)、痰液(7.7％)、和其他感染標(biāo)本(5.1％)中?！　?種藥物的

3、相對抗腸球菌活性(MIC50,MIC90)從強(qiáng)到弱為：妥舒沙星(MIC50,0.5mg/L；MIC90,2mg/L)＞加替沙星(MIC50,1mg/L；MIC90,4mg/L)，司帕沙星(MIC50，1mg/L；MIC90,4mg/L)＞左氧氟沙星(MIC50,2mg/L；MIC90,16mg/L)＞氧氟沙星(MIC50,4mg/L；MIC90,64mg/L)，環(huán)丙沙星(MIC50,4mg/L；MIC90,64mg/L)；以妥舒沙星抗腸

4、球菌活性最強(qiáng)，氧氟沙星和環(huán)丙沙星抗腸球菌活性最差。　　以環(huán)丙沙星的MIC≥4mg/L解釋為耐藥為標(biāo)準(zhǔn)，從78株腸球菌中篩選出11株糞腸球菌環(huán)丙沙星耐藥株、8株屎腸球菌環(huán)丙沙星耐藥株，PCR擴(kuò)增其Ⅱ型拓?fù)洚悩?gòu)酶基因。測序后分析發(fā)現(xiàn)，糞腸球菌gyrA基因的QRDR第98或99位堿基G→T或T→G的突變導(dǎo)致所編碼的第83位絲氨酸被異亮氨酸或精氨酸替代，而屎腸球菌僅第83位絲氨酸Ser(AGT)突變?yōu)榫彼?AGG)；糞腸球菌gyrA基因的Q

5、RDR第110位堿基A→G的突變、屎腸球菌第109位堿基G→A的突變分別導(dǎo)致所編碼的第87位谷氨酸被甘氨酸或賴氨酸替代；糞腸球菌parC基因QRDR第96或97位堿基G→T或T→G的突變導(dǎo)致所編碼的第80位絲氨酸被異亮氨酸或精氨酸替代，而屎腸球菌第80位絲氨酸Ser(AGC)突變?yōu)楫惲涟彼?ATC)；糞腸球菌parC基因QRDR第108位堿基A→C的突變導(dǎo)致所編碼的第84位谷氨酸被丙氨酸替代；parC基因突變的臨床株，對環(huán)丙沙星的耐藥水

6、平，其MIC值介于無突變株和同時存在gyrA和parC基因突變株之間；gyrB、parE基因編碼的氨基酸序列沒有改變?！　晒鈾z測腸球菌對環(huán)丙沙星的吸收量發(fā)現(xiàn)，對環(huán)丙沙星的吸收關(guān)鍵在起初5min，菌體吸收環(huán)丙沙星有一定極限，耐藥株菌體內(nèi)環(huán)丙沙星的吸收量小于敏感株；耐藥株和敏感株對利血平的敏感性不同，加入利血平可以使菌體內(nèi)環(huán)丙沙星的吸收量顯著上升，但耐藥株的吸收量明顯大于敏感株。 結(jié)論:1.在腸球菌感染中，以糞腸球菌最常見，其次

7、是屎腸球菌，其它種類腸球菌較少見；標(biāo)本主要來源于尿液。2.氟喹諾酮類抗菌藥新品種妥舒沙星、司帕沙星和加替沙星抗腸球菌活性比老一代藥物強(qiáng)，腸球菌臨床株對氟喹諾酮類藥物均有不同程度耐藥現(xiàn)象。3.gyrA基因83、87位突變及parC基因80、84位突變都可引起腸球菌對氟喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥，但以parC基因80位突變?yōu)橹?；低耐株往往是parC基因單位點(diǎn)突變，高耐株同時合并有g(shù)yrA基因雙位點(diǎn)突變；拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ可能是環(huán)丙沙星對腸球菌的首要靶酶