自擬寶腎方對糖尿病大鼠腎組織CTGF和MMP-9的影響.pdf

1、糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病嚴重的微血管并發(fā)癥，是導(dǎo)致終末期腎病的重要原因。其發(fā)病機理尚未完全闡明，一般認為它與高血糖、多元醇.肌醇代謝異常、氧化應(yīng)激、血流動力學(xué)障礙、凝血機制障礙、蛋白的非酶促糖基化等多種因素協(xié)同作用有關(guān)。糖尿病腎病重要的病理改變之一就是細胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)的堆積。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transformin growthfactorβ1，

2、TGF-β1)和結(jié)締組織生長因子(Connective tissue growth factor，CTGF)目前已被公認為是包括糖尿病腎小球硬化在內(nèi)的多種纖維化病變發(fā)病機制中的驅(qū)動因子，是抗纖維化治療的有效靶點。研究證實，轉(zhuǎn)化生長因子-β1可調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，促進細胞外基質(zhì)的合成和沉積，減少細胞外基質(zhì)的降解，其過度表達可引起腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化。結(jié)締組織生長因子(CTGF)是TGF-β1的下游效應(yīng)介質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)CTGF不介導(dǎo)TGF-β1

3、的抗增殖和抗炎作用，僅介導(dǎo)TGF-β1過度表達時促細胞外基質(zhì)合成的作用。它可以通過自分泌與旁分泌的形式，刺激腎小球系膜細胞和其他腎臟固有細胞的增殖，促進細胞外基質(zhì)的堆積，參與著腎小球肥大、腎小球硬化以及間質(zhì)纖維化。 基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinase，MMPs)主要起到降解細胞外基質(zhì)的作用。基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9，MMP-9)又稱明膠酶B，是MMPs

4、家族的主要成員之一，其作用底物主要是IV、V、VII、X型膠原、明膠以及彈性纖維。MMP-9以酶原形式分泌，必須激活后才能降解膠原及其它基質(zhì)蛋白。普遍認為是纖溶酶原在纖溶酶原激活物的作用下活化為纖溶酶，后者以級聯(lián)放大的瀑布效應(yīng)激活MMP-9而導(dǎo)致基質(zhì)降解。 腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)可在短時間內(nèi)建立糖尿病大鼠模型，并出現(xiàn)糖尿病腎臟損害。本文以此模型為基礎(chǔ)，探討糖尿病腎病早期結(jié)締組織生長因子和基質(zhì)金

5、屬蛋白酶-9的表達以及自擬中藥寶腎方治療糖尿病腎病的機制。 目的： 本研究以自擬中藥寶腎方湯劑干預(yù)實驗性糖尿病大鼠，應(yīng)用免疫組化方法檢測對照組(C組)、糖尿病組(D組)、糖尿病寶腎方治療組(DB組)腎組織CTGF和MMP-9表達水平，并檢測各組大鼠的生化指標，探討自擬中藥寶腎方湯劑保護腎臟的作用機理，為臨床防治糖尿病腎病提供實驗性理論依據(jù)。 方法： 將實驗動物Wistar大鼠隨機分為對照組(C組)、糖尿病

6、組(D組)、糖尿病寶。腎方治療組(DB組)。對照組大鼠腹腔注射枸櫞酸緩沖液(假造模)，糖尿病組大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型，糖尿病寶腎方治療組是在建立糖尿病模型基礎(chǔ)上給予寶腎方湯劑灌胃。在實驗8周后，各組大鼠留取血、尿以及腎臟標本，觀察三組大鼠腎重(Weight of kidney)、體重(Bodyweight)、24小時尿蛋白(24hUpro)、血糖(Glu)、膽固醇(CHO)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)

7、以及腎組織病理學(xué)變化；并通過免疫組織化學(xué)方法檢測各組大鼠腎組織中CTGF和MMP-9的表達情況。 結(jié)果： 和對照組相比，糖尿病組腎組織CTGF蛋白表達明顯升高[(0.234±0.009)vs(0.146±0.007)，P<0.01]，而MMP-9蛋白表達明顯降低[(0.146±O.006)vs(0.236±0.007)，P<0.01]，腎臟肥大指數(shù)、24小時尿蛋白、血糖、膽固醇、尿素氮、血肌酐明顯升高(P<0.01)；和

8、糖尿病組相比，寶腎方治療組腎組織CTGF蛋白表達降低[(0.194±0.008)vs(0.234±0.009)，P<0.01]，而MMP-9蛋白表達升高[(0.175±0.007)vs(0.146±0.006)，P<0.01]，腎臟肥大指數(shù)降低(P<0.05)，24小時尿蛋白、膽固醇、尿素氮、血肌酐也降低(P<0.01)。 結(jié)論： 自擬寶腎方對糖尿病大鼠腎臟具有保護作用，其機制可能與影響腎組織CTGF和MMP-9的表達有