高血糖、氧化低密度脂蛋白致動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)基因的研究.pdf

1、背景和目的：高血脂和糖尿病是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病中兩個(gè)最主要的危險(xiǎn)因素之一，而且在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的不同階段是相互協(xié)同的。氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)是最具有致AS作用的脂質(zhì)成分。而糖尿病是冠心病的等危因素，糖尿病的主要表現(xiàn)之一是血糖的不穩(wěn)定，其中又以高血糖為主。因此本實(shí)驗(yàn)分別研究Ox-LDL和高糖對(duì)單核/巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞的影響以及基因表達(dá)譜的變化，為冠心病的防治探索新思路。 方法：以人前單核白血病細(xì)胞株THP-1細(xì)胞作

2、為人單核細(xì)胞的體外培養(yǎng)模型。以佛波醇脂PMA(160nmol/L)48小時(shí)誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞。分別加入血糖(30mmol/L)、Ox-LDL(50ug/mL)、糖(30mmol/L)+Ox-LDL(50ug/mL)72小時(shí)，使其轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞。油紅O染色、透射電鏡觀察鑒定是否能形成泡沫細(xì)胞，用BiostarH-40s表達(dá)譜芯片(含有4096條基因)檢測(cè)基因表達(dá)差異。 結(jié)果：THP-1細(xì)胞在PMA作用48小時(shí)后，分化為成熟巨噬細(xì)

3、胞。1.單純高血糖用72小時(shí)后，油紅O染色細(xì)胞內(nèi)未見(jiàn)脂質(zhì)沉積。2.Ox-LDL作用72小時(shí)后，油紅O染色提示泡沫細(xì)胞基本形成，透射電鏡可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)脂滴聚集。BiostarH-40s表達(dá)譜芯片檢測(cè)示Ox-LDL刺激后差異表達(dá)3倍以上的基因共87條，其中下調(diào)共58條，上調(diào)共29條。主要涉及脂代謝有關(guān)的基因14條，啟動(dòng)和加重炎癥的基因8條，細(xì)胞凋亡有關(guān)的基因17條以及信號(hào)傳導(dǎo)基因14條等。巨噬細(xì)胞經(jīng)高糖+ox-LDL作用72小時(shí)后，油紅O染色和

4、透射電鏡提示明顯的泡沫細(xì)胞形成。BiostarH-40s表達(dá)譜芯片檢測(cè)示高血糖+ox-LDL較ox-LDL刺激后差異表達(dá)3倍以上的基因共109條，其中下調(diào)78條，上調(diào)31條。 結(jié)論：1.單純高血糖不能形成泡沫細(xì)胞。2.Ox-LDL可使THP-1細(xì)胞成功轉(zhuǎn)變成泡沫細(xì)胞?；蛐酒夹g(shù)能大規(guī)模平行檢測(cè)不同樣品基因表達(dá)差異。本研究檢測(cè)結(jié)果提示Ox-LDL刺激后其下調(diào)3倍以上的基因共58條。上調(diào)3倍以上的基因共29條。3.在高脂環(huán)境下，高