NK細胞功能異常導致HBV慢性免疫逃逸和急性肝再生抑制的機制研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV)感染是導致慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要病因之一，嚴重威脅人類的健康。作為一種非細胞毒性嗜肝病毒，HBV可在肝細胞內(nèi)復制，病毒本身并不造成肝細胞的破壞，但由此引起的免疫應答一方面有利于清除病毒，另一方面也可導致肝臟損傷。傳統(tǒng)理論認為CD4+T細胞和CD8+T細胞在抗HBV感染及其引起的免疫損傷中起主導作用，但是隨著肝臟天然免疫系統(tǒng)理論的提出，肝臟中的天然免疫細胞在HBV感染及其免疫致病中發(fā)揮的效應引起學者們的高度重視

2、，尤其是NK細胞在HBV感染中的作用越來越受到關注。研究表明NK細胞參與HBV感染后的免疫應答，HBV逃逸NK細胞的清除作用與病毒持續(xù)性感染密切相關。同時慢性HBV感染者對于外界因素如化學毒物、酒精、細菌感染等刺激后肝細胞更加容易損傷，影響了肝臟后續(xù)的再生能力。
　　 本研究通過對HBV DNA復制水平不同的病毒感染者進行分組，探討NK細胞在HBV感染者免疫應答中的作用，通過流式細胞術分析不同HBV感染狀態(tài)的病人外周血NK細胞的

3、比例、功能、表面活化性受體和抑制性受體的表達，發(fā)現(xiàn)HBVDNA病毒載量增高患者伴隨NKG2A+NK細胞比例升高，NKG2A抑制NK細胞抗病毒活性導致HBV持續(xù)感染，可能是HBV逃逸NK細胞攻擊的原因之一，阻斷NKG2A有可能成為治療HBV持續(xù)感染的靶點。同時在化學毒物誘導的小鼠模型中觀察到肝臟NK細胞對于肝臟損傷后再生的影響，為了解慢性HBV感染者在接觸化學毒物后NK細胞對于肝臟的修復能力提供研究基礎。主要研究結果分以下兩部分：

4、　　 (一)NK細胞高表達NKG2A介導HBV慢性免疫逃逸
　　 1.病毒復制限制性CHB病人NK細胞比例增高
　　 在病毒復制水平受到限制的CHB病人(HBV DNA＜105copies/ml)外周血中NK細胞較正常對照組、病毒復制水平較高組和肝硬化病人明顯升高，并且與HBVDNA拷貝數(shù)和血清ALT呈明顯負相關，說明NK細胞減少不利于HBV的清除和病情的緩解。進一步對NK細胞的功能分析發(fā)現(xiàn)：IL-12體外刺激病毒復制

5、限制性CHB病人NK細胞后，其分泌IFN-γ的能力要明顯高于高病毒復制的CHB病人和正常對照組；NK細胞殺傷試驗證明，病毒復制限制性CHB病人與高病毒載量的CHB病人相比，NK細胞表達CD107a、殺傷K562細胞的能力明顯增強。
　　 2.HBV DNA拷貝數(shù)升高患者伴隨NKG2A+NK細胞升高
　　 對大量HBV病人進行NK細胞活化性受體和抑制性受體檢測發(fā)現(xiàn)，不同研究對象活化性受體NKG2D，NKG2C，NKp30，

6、NKp44，NKp46，抑制性受體KIR2DL3，KIR3DL1，CD158b，CD158a等均無明顯改變，但抑制性受體NKG2A有明顯改變，在低拷貝病人中NKG2A的表達較低，在高拷貝病人和肝硬化病人中NKG2A+NK細胞比例明顯增高，并且與HBV DNA病毒載量和ALT表達呈正相關關系，說明NKG2A的高表達抑制了NK細胞的活化，不利于HBV清除和病情緩解。
　　 3.阻斷NKG2A能恢復HBV持續(xù)感染者NK細胞功能，甚至清

7、除HBV
　　 (二)NK細胞高分泌TNF-α抑制急性肝臟損傷后再生
　　 上述實驗結果顯示NK細胞對于清除HBV感染有重要作用，但同時NK細胞也可導致部分肝臟損傷，鑒于肝臟損傷均伴隨肝臟自身的再生修復，本研究將進一步探討NK細胞在肝臟再生的作用。我們采用了化學毒物CCl4誘導的肝臟損傷為肝臟再生模型，研究NK細胞的活化對于肝臟再生的影響。結果發(fā)現(xiàn)，實驗鼠在同時注射了poly I∶C和CCl4之后能夠明顯抑制肝臟再生，用

8、AsGM1清除NK細胞或用NK1.1抗體清除NK1.1+細胞(包含NK細胞和NKT細胞)，poly I∶C抑制的肝臟再生得到明顯恢復，提示NK細胞參與肝臟再生抑制。其機理是poly I∶C和CCl4能夠誘導肝臟中NK細胞的大量聚集和活化，細胞因子IFN-γ和TNF-α的分泌明顯增高，并且體內(nèi)中和TNF-α而不是IFN-γ之后肝臟再生功能得到恢復。這些結果表明在CCl4誘導的肝臟損傷模型中poly I∶C活化的NK細胞通過分泌TNF-α抑