兔異體脂肪干細(xì)胞增強(qiáng)脂肪移植效果的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【背景】
　　由于腫瘤術(shù)后、外傷、頜面部燒傷等各種原因造成的頜面部軟組織缺損,直接影響患者發(fā)音、咀嚼、吞咽、呼吸及美觀等多項(xiàng)生理功能,是口腔頜面外科醫(yī)師面臨的主要問題之一,如何改善此類生理功能,提高患者術(shù)后的生存質(zhì)量,是每一位口腔頜面外科醫(yī)生應(yīng)該掌握的基本技能之一。目前臨床上主要的修復(fù)方法有自體組織瓣、人工合成材料、顆粒脂肪移植、可注射自體脂肪干細(xì)胞移植等方法,其中自體脂肪干細(xì)胞復(fù)合顆粒脂肪能提高脂肪移植效果,但是,自體脂肪干細(xì)胞

2、應(yīng)用存在一定的局限性,如體外培養(yǎng)自體干細(xì)胞周期長、部分患者自身干細(xì)胞來源有限或不愿接受脂肪抽吸術(shù)等。文獻(xiàn)報(bào)道,異體干細(xì)胞具有免疫原性低的特點(diǎn),并且已用于部分臨床病例。
　　【目的】
　　探討異體脂肪干細(xì)胞(adipose-derivedstemcells,ADSCs)復(fù)合脂肪顆(adiposegranule,AG)、富血小板纖維蛋白(platelet-richfibrin,PRF)降低移植脂肪吸收率,改善脂肪移植效果以及監(jiān)測

3、移植后免疫學(xué)指標(biāo),為臨床上實(shí)施異體脂肪干細(xì)胞移植提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及理論基礎(chǔ)。
　　【方法】
　　1、建立兔耳動物模型:以兔耳中動脈末端動靜脈分叉處與耳中動脈與內(nèi)側(cè)耳緣靜脈交界的中點(diǎn)為圓心,畫一個(gè)半徑15cm的圓。用骨膜剝離器將皮膚與骨膜分開,按照實(shí)驗(yàn)分組要求,用18＃注射器將2ml復(fù)合物移植到此部位。
　　2、家兔脂肪干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定:無菌條件下,從家兔背部取出約8ml的脂肪,利用消化離心法培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞。將兔脂肪

4、干細(xì)胞置于37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。通過HE染色、流式檢測鑒定移植前的細(xì)胞是否為脂肪干細(xì)胞。
　　3、PRF的制備:無菌條件下,取家兔血液20ml置于玻璃離心管內(nèi),迅速離心,3000r/min,10min,取離心管內(nèi)中間層部分,置于4℃冰箱內(nèi)備用。
　　4、實(shí)驗(yàn)分組:取30只健康新西蘭兔,隨機(jī)分成5組,每組6只:A組,AG;B組:AG+PRF;C組:AG+ADSCs(adipose-derivedstemcells,脂

5、肪干細(xì)胞);D組:AG+PRF+自體ADSCs;E組:AG+PRF+異體ADSCs。
　　5、可注射脂肪顆粒復(fù)合物的體內(nèi)移植:將AG、自體、異體ADSCs、PRF按照實(shí)驗(yàn)分組移植到兔耳的相應(yīng)部位。
　　6、復(fù)合物移植后,對其形態(tài)學(xué)及其免疫學(xué)觀測:通過大體外觀、HE染色、兔耳透光實(shí)驗(yàn)、卡尺、B超測量各組存活率來觀測形態(tài)學(xué)的改變。通過組織切片HE染色觀察、外周血淋巴細(xì)胞亞群CD4/CD8測定、血漿IL-2和IL-4測定進(jìn)行免疫學(xué)

6、評價(jià)。
　　7、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法。利用SPSS18.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,實(shí)驗(yàn)各組之間進(jìn)行比較。
　　【結(jié)果】
　　1、從家兔背部分離并培養(yǎng)的第三代脂肪干細(xì)胞,鏡下觀察細(xì)胞呈短梭形鋪滿瓶底,HE染色細(xì)胞呈長梭形或多邊形,流式細(xì)胞儀檢測培養(yǎng)細(xì)胞CD29為陽性(87.39±2.85)%,CD31呈陰性,(1.37±0.61)%,通過成骨、成脂誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn)其具有成骨、成脂分化的潛能。
　　2、復(fù)合物移植到家兔體內(nèi)后,在形態(tài)學(xué)以及

7、免疫學(xué)方面的比較
　　在形態(tài)學(xué)方面,5個(gè)分組移植后,在大體外觀方面,均無液化、壞死、感染,移植后家兔全身情況無明顯異常;通過卡尺、B超測量并計(jì)算出各組的存活率,移植后3月A至E五組脂肪存活率分別為:54.39±7.72,63.72±3.93,65.39±2.48,72.62±4.72,72.56±4.26,移植后6月A至E五組脂肪存活率分別為38.73±9.81,61.29±1.61,62.34±1.65,73.94±2.73,6

8、9.83±5.12,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,D、E兩組無顯著性差異(P>0.05),但與其他各組存在顯著性差異(P<0.05);切片HE染色,各組脂肪組織結(jié)構(gòu)清晰完整,未見明顯的液化、壞死及感染等,而在組織學(xué)方面,D、E兩組未見明顯差異,但與其他各組有明顯差異。在免疫學(xué)方面,通過切片HE染色,各組均未見明顯的液化、壞死等,而且無明顯的免疫排斥反應(yīng);外周血淋巴亞群CD4/CD8比值,移植后3月,D、E兩組分別為:1.38±0.059,1.31±0.

9、063,移植后6月,D、E兩組分別為1.31±0.05,1.21±0.05,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,D組、E組兩組間無顯著性差異(P>0.05),無明顯的免疫排斥反應(yīng);血漿IL-2的水平,移植后3個(gè)月后,D、E兩組分別為:161.5±12.41,166.1±12.43,移植后6月,血漿IL-2的水平,D、E兩組分別為150.8±12.51,152.5±12.49,血漿IL-4的水平,移植后3個(gè)月,D、E兩組分別為:64.92±8.61,63.18±

10、8.57,移植后6月血漿IL-4的水平,D、E兩組分別為61.58±8.64,62.58±8.85,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)D組、E組兩組間無顯著性差異(P>0.05),無明顯的免疫排斥反應(yīng)。
　　【結(jié)論】
　　1、從家兔體內(nèi)經(jīng)過消化離心法得到的細(xì)胞,具有較強(qiáng)的增殖、分化能力,符合脂肪干細(xì)胞的特征。
　　2、ADSCs復(fù)合PRF能顯著提高移植顆粒脂肪的存活率,促進(jìn)脂肪再生。異體ADSCs與自體ADSCs具有類似促進(jìn)脂肪再生作用。