LIP在真核細胞中過表達的功能研究.pdf

1、七鰓鰻屬于現(xiàn)存最古老的具有適應性免疫系統(tǒng)的無頜類脊椎動物之一，可作為研究適應性免疫系統(tǒng)進化的模式生物。目前七鰓鰻免疫系統(tǒng)的研究一直傾向于可變淋巴受體(variable lymphocyte receptor, VLR)，而關于其細胞毒相關免疫分子的研究幾乎一片空白。而本實驗室在七鰓鰻免疫系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)了一種靶向性殺傷腫瘤細胞的蛋白，命名為七鰓鰻免疫蛋白(Lamprey Immune Protein，LIP)。本實驗室證實，LIP對多種腫瘤細

2、胞有靶向殺傷作用，但殺傷機制有待研究，LIP在七鰓鰻體內(nèi)的角色也是懸而未決的謎題。本文建立了LIP真核過表達系統(tǒng)，探究了LIP在H293T細胞以及HeLa細胞內(nèi)的功能。
　　本文通過分子克隆技術構(gòu)建了pIRES2-AcGFP1-Nuc-LIP(LIP與GFP獨立非融合表達)和pEGFP-N1-LIP(LIP與GFP融合表達)表達載體，用脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染兩種細胞，應用蛋白質(zhì)免疫印跡法，實時熒光定量PCR，乳酸脫氫酶釋放檢測，細胞器染

3、色，細胞凋亡以及活性氧水平檢測，細胞周期分析，基因芯片，免疫熒光等方法驗證真核重組LIP的表達及探究其功能。
　　實驗結(jié)果證實LIP在兩種細胞中成功過表達;過表達LIP引起HeLa細胞LDH釋放，線粒體斷裂，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)空泡化，PS外翻，ROS爆發(fā)，P53信號通路激活以及細胞周期G2M期阻滯的現(xiàn)象。以上現(xiàn)象在空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞以及H293T細胞中均未發(fā)現(xiàn)。而對H293T細胞，過表達LIP主要激活了胞內(nèi)IgA的產(chǎn)生通路。
　　本文結(jié)果