SSAT2在睪丸中的表達(dá)及其在Leydig細(xì)胞中的功能研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　Spermidine/spermine N1-acetyltransferase2(SSAT2)屬于SSAT家族成員。研究發(fā)現(xiàn)， SSAT2并不同于SSAT家族其他成員一般參與多胺代謝。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，SSAT2在小鼠睪丸中也有明顯表達(dá)，且在busulfan處理小鼠睪丸中表達(dá)明顯上調(diào)。因此，本課題擬研究SSAT2在小鼠睪丸中的表達(dá)定位情況，并制備SSAT2上調(diào)TM3 Leydig細(xì)胞株，探尋SSAT2在小鼠睪

2、丸Leydig細(xì)胞中的功能。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　采用免疫組化和免疫熒光實(shí)驗(yàn)定位SSAT2在小鼠睪丸中的表達(dá)。腹腔注射busulfan（30 mg/kg）制備睪丸受損小鼠模型，Real-time PCR實(shí)驗(yàn)檢測小鼠睪丸中SSAT2 mRNA表達(dá)情況，Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測小鼠睪丸中SSAT2蛋白表達(dá)情況。體外busulfan處理TM3 Leydig細(xì)胞，Real-time PCR和Western blott

3、ing方法觀察細(xì)胞SSAT2表達(dá)水平的改變情況。
　　制備SSAT2慢病毒，轉(zhuǎn)染TM3 Leydig細(xì)胞，構(gòu)建SSAT2過表達(dá)細(xì)胞模型。采用MTT和FCM檢測細(xì)胞生長活性和細(xì)胞周期，ELISA實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞睪酮產(chǎn)生量，Western blotting分析SSAT2參與的hCG誘導(dǎo)的睪酮產(chǎn)生的機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1.免疫組化結(jié)果顯示SSAT2表達(dá)于小鼠睪丸組織中的Leydig細(xì)胞和Sertoli細(xì)胞區(qū)域，免疫熒光顯

4、示SSAT2定位于Leydig細(xì)胞胞質(zhì)。
　　2. Real-time PCR和Western blotting結(jié)果顯示生殖受損小鼠睪丸及TM3 Leydig細(xì)胞中SSAT2 mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)。
　　3.成功構(gòu)建慢病毒過表達(dá)細(xì)胞模型，MTT和FCM結(jié)果表明SSAT2對小鼠TM3 Leydig細(xì)胞的生長活性具有抑制作用，可使細(xì)胞滯留于G0/G1期。
　　4. ELISA結(jié)果表明SSAT2過表達(dá)可抑制hCG刺

5、激的睪酮產(chǎn)生， Western blotting結(jié)果顯示SSAT2過表達(dá)可抑制hCG誘導(dǎo)的StAR蛋白水平的表達(dá)上調(diào)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　SSAT2主要表達(dá)于小鼠睪丸Leydig和Sertoli細(xì)胞，busulfan處理可明顯上調(diào)小鼠睪丸與TM3 Leydig細(xì)胞中SSAT2的表達(dá)水平，提示SSAT2與睪丸功能有關(guān)。
　　成功制備SSAT2過表達(dá)細(xì)胞株，SSAT2過表達(dá)可抑制TM3 Leydig細(xì)胞生長活性并影響細(xì)胞