非動物源性培養(yǎng)條件下臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為汗腺樣細(xì)胞的生物學(xué)特性研究.pdf

1、大面積深度燒、創(chuàng)傷會造成皮膚的正常結(jié)構(gòu)和功能嚴(yán)重受損,其中皮膚附屬器如汗腺等結(jié)構(gòu)的破壞及功能喪失將嚴(yán)重影響燒、創(chuàng)傷患者的生存質(zhì)量。目前已有研究證明間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells,MSCs)能有效參與促進(jìn)皮膚與汗腺損傷的修復(fù)與再生,有望促進(jìn)燒、創(chuàng)傷后患者的修復(fù)效果并改善其生存質(zhì)量。MSCs是一類具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞,目前在研究和臨床上的應(yīng)用也越來越廣泛。我們前期的研究發(fā)現(xiàn),骨髓來源的MSCs(Bonem

2、arrowderived-MSCs,BMMSCs)在特定的誘導(dǎo)環(huán)境下能夠成功地向汗腺樣細(xì)胞分化并修復(fù)受損的汗腺組織。然而,受到細(xì)胞培養(yǎng)周期的限制,無法在燒、創(chuàng)傷治療的早期得以應(yīng)用,同時BMMSCs的獲取須行骨髓穿刺術(shù),給供者造成一定痛苦,且BMMSCs的增殖及分化潛能隨供者年齡的增大而下降。因此,尋找新的MSCs來源是目前國內(nèi)外干細(xì)胞研究的熱點。
　　臍帶作為MSCs的一種可靠來源,較骨髓容易獲得,具有操作簡便,來源豐富,分化能力

3、強(qiáng),對供者無傷害,移植物抗宿主病(GVHD)發(fā)生率低,干細(xì)胞所占比例大以及避免倫理爭議等諸多優(yōu)點,更有望應(yīng)用于臨床治療。目前其多向分化潛能已得到證實,因此臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞(umbilicalcordderived-MSCs,UCMSCs)可以作為一種嶄新的細(xì)胞治療策略應(yīng)用于燒傷后汗腺損傷修復(fù)再生研究。我們在前期研究中已初步發(fā)現(xiàn)UCMSCs在特定的誘導(dǎo)環(huán)境下具有向汗腺樣細(xì)胞分化的潛能。然而,因培養(yǎng)條件以及血清使用、添加細(xì)胞因子種類等不

4、同,造成不同批次的細(xì)胞表型、增殖能力、長期培養(yǎng)后的細(xì)胞功能以及向汗腺細(xì)胞的分化能力等存在較大差異,直接影響了UCMSCs在汗腺再生研究中的應(yīng)用。因此亟待建立一種符合臨床使用的非動物源性培養(yǎng)條件下UCMSCs分離、培養(yǎng)和鑒定方法以及向汗腺細(xì)胞分化的標(biāo)準(zhǔn)化體系,為開展進(jìn)一步的基礎(chǔ)研究和深入的臨床前實驗研究奠定實驗基礎(chǔ)。
　　本研究分為以下兩部分:1.首先,建立非動物源性培養(yǎng)條件下UCMSCs分離、培養(yǎng)與鑒定體系,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞

5、的表面抗原的表達(dá)、分析細(xì)胞的增殖活性。2.建立非動物源性培養(yǎng)條件下UCMSCs向汗腺細(xì)胞分化體系,采用流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR、western-blot以及染色體核型分析等鑒定分化后汗腺樣細(xì)胞的標(biāo)志物以及臨床前應(yīng)用的安全性。實驗結(jié)果顯示,UCMSCs在無動物血清的安全培養(yǎng)條件下依然能保持MSCs特有的生物學(xué)表型和增殖能力,且各組間無明顯差異;經(jīng)無動物血清汗腺分化培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下,UCMSCs可以成功地向汗腺樣細(xì)胞分化,誘導(dǎo)后細(xì)胞的汗腺標(biāo)記