c-FLIP(L)在乳腺癌中的表達(dá)及對(duì)TRAIL通路調(diào)節(jié)作用的初步探討.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文cFLIP（L）在乳腺癌中的表達(dá)及對(duì)TRAIL通路調(diào)節(jié)作用的初步探討姓名：臧鳳琳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：孫保存20090501天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文研究結(jié)果1cFLIP(L)蛋白在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中呈低～中等程度表達(dá)(陽(yáng)性率為3636％)，在癌旁乳腺組織中呈高表達(dá)(陽(yáng)性率為75％)；其中強(qiáng)陽(yáng)性染色病例在乳腺癌組織中占1429％，在癌旁乳腺組織中占5758％；兩組比較有顯著性差別(氏O01)。

2、統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，cFLIP(L)蛋白高表達(dá)與患者年齡(35歲)、絕經(jīng)前、未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、較早的pTNM分期(III期)密切相關(guān)以及ER、PR蛋白的表達(dá)水平相關(guān)(Po05)。2在體外培養(yǎng)的不同乳腺癌細(xì)胞系中，均可檢NNcFLIP(L)mRNA和蛋白的表達(dá)，但cFLIP(L)在不同的細(xì)胞間存在表達(dá)差異。TRAIL通路受體DR4、DR5在不同的乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)水平不同，相對(duì)于每一株細(xì)胞來(lái)說(shuō)，二者的陽(yáng)性率呈現(xiàn)一致性。3免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，cFL

3、IP(L)蛋白的表達(dá)與DR4受體的表達(dá)呈正相關(guān)，二者之間關(guān)系有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(rs=0452，P=0035)；對(duì)于DR5受體，雖然呈現(xiàn)出cFLIP(L蛋白表達(dá)越高，DtL5受體表達(dá)越高的趨勢(shì)，但二者之間無(wú)明顯相關(guān)性(rs=O419，P0066)。此外，cFLIP(L)蛋白的表達(dá)與凋亡指數(shù)正相關(guān)(rs=0554，P=0005)；該蛋白表達(dá)升高增殖指數(shù)有所下降，但二者之間無(wú)顯著相關(guān)性。4轉(zhuǎn)染特異性表達(dá)質(zhì)粒發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染后24h，cFLIP(L)mR

4、NA和蛋白含量出現(xiàn)升高；轉(zhuǎn)染后48h和72hmRNA含量仍能維持較高水平，蛋白的表達(dá)量有所下降。在此基礎(chǔ)上，TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞4h，抑制率出現(xiàn)變化，隨時(shí)間延長(zhǎng)呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，其中處理24h可達(dá)到較高水平；每個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)下TRAIL濃度為10ng／ml時(shí)的抑制率均較高，隨濃度加大仍能維持。5TRAIL誘導(dǎo)后，在高表達(dá)cFLIP(L)的MDAMB231細(xì)胞中，凋亡細(xì)胞比例可升至5165％；經(jīng)電泳分析，其DNA斷裂呈規(guī)律的階梯狀；此時(shí)大部

5、分細(xì)胞失去原有形態(tài)，胞體圓縮，間隙增大，折光性減弱，分裂像少見(jiàn)。6應(yīng)用TRAIL誘導(dǎo)凋亡后，在高表達(dá)cFLIP(L)的MDAMB231細(xì)胞中，caspase一8活性提升5倍，caspase3活性提升3倍，caspase9、caspase2活性變化不明顯。7與轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞相比，TRAIL可誘導(dǎo)cFLIP(L)高表達(dá)細(xì)胞內(nèi)的caspase8蛋白發(fā)生酶切降解，全長(zhǎng)的p55caspase8含量減少，胞漿中出現(xiàn)p43、p18和p10亞片段；同時(shí)