雌激素對乳腺癌CD147表達的調(diào)節(jié)及在乳腺正常發(fā)育和乳腺癌進展轉(zhuǎn)移中的意義.pdf

1、研究背景：
　　眾所周知，乳腺癌是全球女性高發(fā)的主要惡性腫瘤之一。乳腺癌是內(nèi)分泌相關(guān)性腫瘤。雌激素在乳腺癌的發(fā)病、進展和轉(zhuǎn)移中起重要作用。乳腺癌主要的致死因素是轉(zhuǎn)移。因此，乳腺癌轉(zhuǎn)移的防治，是降低乳腺癌病死率的關(guān)鍵。然而，有關(guān)乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子機制，目前仍未有透徹的了解。CD147是一屬于免疫球蛋白超家族的跨膜糖蛋白，可誘導周圍細胞表達并分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrixmetalloproteinase，MMP）。MMP引發(fā)的基質(zhì)降

2、解在腫瘤的轉(zhuǎn)移過程中起著必不可少的作用。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，很多腫瘤呈現(xiàn)CD147過表達。然而，有關(guān)CD147自身表達的調(diào)控卻所知甚少。
　　雌激素的信號經(jīng)其受體ER介導。ER有兩種，即ERα和ERβ。目前對ERα的研究更為深入透徹。本研究所述ER指ERα。ER在未與配體結(jié)合時，與熱休克蛋白HSP結(jié)合存在于細胞質(zhì)中。在與雌激素結(jié)合后，其空間構(gòu)象發(fā)生改變，被轉(zhuǎn)運至細胞核，以二聚體形式結(jié)合于ERE位點，啟動靶基因轉(zhuǎn)錄。ERE是ER的經(jīng)典作用位點

3、。除ERE外，ER還可與SP1或AP1蛋白結(jié)合，分別作用于SP1和AP1位點，加強這兩個蛋白的轉(zhuǎn)錄活性。SP1和AP1被稱為ER的非經(jīng)典作用位點，是通過SP1和AP1間接發(fā)揮作用。鑒于CD147的啟動子上游序列中含有SP1蛋白結(jié)合位點，CD147應該是ER作用的靶基因之一，我們假設，雌激素通過激活CD147的表達，在乳腺的正常發(fā)育和乳腺癌的浸潤生長以及轉(zhuǎn)移過程中，發(fā)揮了重要的作用。
　　本研究將對CD147，以及雌激素和其受體信號

4、系統(tǒng)在乳腺癌的進展、轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮的生物學作用有更深一步的了解，為探討CD147作為乳腺癌靶向治療的靶點提供進一步的理論基礎。
　　目的：
　　探究雌激素對乳腺癌CD147表達的調(diào)節(jié)及在乳腺正常發(fā)育和乳腺癌進展轉(zhuǎn)移中的意義。檢測成年小鼠卵巢切除后子宮CD147表達的變化，原則證明CD147表達受ER調(diào)控，雌激素是上游信號；觀察人乳腺正常組織及ER陽性乳腺癌與ER陰性乳腺癌CD147的表達。用雌激素處理人乳腺癌細胞系，檢測用藥

5、前后細胞中CD147mRNA及蛋白表達水平變化，并觀察雌激素處理后對腫瘤細胞遷移能力的影響。
　　方法：
　　1）將6只8周齡的雌性昆明小白鼠隨機分為兩組，各組3只，一組進行卵巢去勢手術(shù)，另一組進行假手術(shù)作為陰性對照，48h后分別取小鼠子宮，Western-blot檢測兩組小鼠子宮中CD147蛋白表達水平變化。
　　2）在西京醫(yī)院病理科分別取人乳腺正常組織1例和22例ER陽性及18例ER陰性人乳腺癌組織，免疫組織化學染

6、色檢測CD147的表達水平。
　　3）用雌激素處理人乳腺癌細胞系，RT-PCR及Real-timePCR定量檢測用藥前后細胞中CD147mRNA表達水平變化，Western-blot檢測用藥前后細胞中CD147蛋白表達水平變化。
　　4）用雌激素處理ER陽性乳腺癌細胞株MCF-7，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)的變化，對每組細胞做細胞劃痕實驗，對比有無雌激素處理，ER陽性乳腺癌細胞株MCF-7遷移能力的變化。
　　結(jié)果：

7、>　　1)Westernblot檢測顯示卵巢去勢組小鼠48h后子宮CD147表達較對照組明顯降低。
　　2)人正常乳腺上皮細胞膜表達CD147；CD147在乳腺癌組織中表達且主要在癌細胞膜，癌組織邊緣表達強度較高。ER陽性癌組織明顯高于ER陰性癌組織。
　　3)經(jīng)雌激素處理后的ER陽性人乳腺癌細胞系中CD147mRNA及蛋白的表達均呈上升趨勢，而ER陰性人乳腺癌細胞系則無明顯變化。
　　4)應用雌激素處理MCF-7細胞

8、，觀察到雌激素能增快ER陽性乳腺癌細胞株MCF-7的生長和遷移，而去除雌激素作用的ER陽性乳腺癌細胞株MCF-7，觀察其形態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)細胞形態(tài)由梭型變圓。
　　結(jié)論：
　　1)卵巢切除后子宮CD147表達降低。原則證明CD147表達受ER調(diào)控，雌激素是上游信號。
　　2)CD147在乳腺癌細胞膜表達，癌組織與間質(zhì)的交界部表達水平高。ER陽性乳腺癌表達強度高于ER陰性乳腺癌。
　　3)通過細胞實驗，證實雌激素通過E