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1、目的:研究維藥西帕依潰結(jié)安對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型NF-кB 基因表達(dá)的影響,建立RNAi技術(shù)平臺(tái),探討潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的敏感點(diǎn)及維藥西帕依潰結(jié)安治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用靶點(diǎn)。 方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為正常組,潰瘍性結(jié)腸炎模型組,西帕依潰結(jié)安干預(yù)組,5-氨基水楊酸(5-ASA)陽(yáng)性對(duì)照組,生理鹽水(NS)陰性對(duì)照組;采用DNCB和乙酸復(fù)合法建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型;通過半定量RT-PCR分析NF-婦mRNA的表達(dá)水平;克隆大鼠NF-кB的
2、完整編碼區(qū),與pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO載體連接,構(gòu)建pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-NF-кB真核表達(dá)載體;設(shè)計(jì)針對(duì)NF-кB基因的siRNA模板與pSilencer 1.0-U6載體連接,構(gòu)建pSilencer 1.0-U6-siRNA-NF-кB干擾載體;通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,在COS-7細(xì)胞中表達(dá)NF-кB-GFP融合蛋白,應(yīng)用干擾載體進(jìn)行調(diào)節(jié),經(jīng)倒置熒光顯微鏡及Westernblot檢測(cè)NF-кB-GFP
3、融合蛋白的表達(dá),篩選有效的siRNA。 結(jié)果:模型組中大鼠的癥狀、體征、結(jié)腸組織大體標(biāo)本、病理切片均符合潰瘍性結(jié)腸炎模型建立的標(biāo)準(zhǔn);與正常組相比,模型組中NF-кB mRNA表達(dá)水平升高;與模型組相比,西帕依潰結(jié)安干預(yù)組、生理鹽水陰性對(duì)照組、5-ASA陽(yáng)性對(duì)照組NF-кB mRNA表達(dá)水平均降低,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);但西帕依潰結(jié)安干預(yù)組與生理鹽水陰性對(duì)照組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。倒置螢光顯微鏡及Weste
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