蛔蟲感染小鼠前體樹突狀細胞免疫刺激活性的實驗研究.pdf

1、目的： 通過研究蛔蟲感染小鼠骨髓前體樹突狀細胞(pDCs)刺激淋巴細胞增殖的作用及其細胞毒T淋巴細胞的毒性作用，探討蛔蟲感染小鼠pDCs的免疫刺激活性。 方法： 1.動物模型的建立：用灌胃方法建立人蛔蟲—C57BL/6小鼠感染模型，按1000個/只劑量。 2.實驗分組：A—感染組DCs與感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng)；B—感染組DCs與未感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng)；C—未感染組DCs與感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng)：E

2、—用ABF沖擊未感染組的DCs后與未感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng)：F—用B16腫瘤抗原沖擊未感染組的DCs后與未感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng)；并設立一對照組D—未感染組DCs與未感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng)。通過MTT法檢測脾淋巴細胞增殖情況。共分為感染后1、11、34d三個時間段。 3.DC的誘導培養(yǎng)及鑒定：無菌條件下制備小鼠骨髓細胞。培養(yǎng)體系中加入誘導分化因子培養(yǎng)其成為DCs,倒置顯微鏡下觀察DCs的生長情況。用流式細胞術檢測DCs表達

3、CD80的情況，電鏡觀察DCs細胞形態(tài)。 4.脾細胞的分離培養(yǎng)培養(yǎng)：常規(guī)無菌狀態(tài)制備小鼠脾細胞，調(diào)整細胞密度為1×106/ml，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 5.CTL細胞因子的表達：CTL用ELISA方法檢測培養(yǎng)72h后收集的CTL上清中IL-2,TNF-α，IFN-γ，IL-4，IL-10，IL-5的表達量。 6.繪制B16細胞生長曲線：取對數(shù)生長期的B16細胞常規(guī)消化計數(shù)，準確將細胞分別接種于24孔培

4、養(yǎng)板中，每日取3孔計數(shù)，連續(xù)觀察7d。掌握靶細胞基本生長規(guī)律。 7.CTL對B16細胞的影響：將CTL作為效應細胞，B16細胞作為靶細胞，通過MTT法檢測CTL對小鼠黑色素瘤細胞株(B16)的影響。 結(jié)果:　 1.DCs培養(yǎng)不同階段細胞分化程度和形態(tài)各異，培養(yǎng)7d后，細胞表面可見明顯的樹突狀突起。透射電鏡可見典型的DCs的形態(tài)特征。同時流式細胞術檢測CD80處于高表達狀態(tài)。其中感染小鼠CD80的表達為(74.53

5、％±6.42％)，未感染小鼠CD80的表達為(50.12％±3.25％)。 2.細胞增值情況在感染后1d，B組OD值高于D組；在感染后11d,B組OD值稍低于D組：在感染后34d，B組OD值稍高于D組。在三個時間段的任一時間段B、D組間 OD值無顯著性差異，在不同的時間段各組OD值具有顯著性差異。 3.細胞因子分泌情況，在感染后1d、11d B組CTL分泌的IL-4高于D組；在感染后34d,B組CTL，分泌的IL-4低于

6、D組。在感染后1d，B組CTL分泌的IFN-γ高于D組；感染后11d、34d D組CTL分泌的IFN-γ高于B組。在不同時間段以及在同一時間段各組CTL分泌的IFN-γ和IL-4有顯著性的差異。但在各時間段未檢測出CTL有IL-2，IL-5，IL-10，TNF-α細胞因子的分泌。 4.B16細胞從第2d開始進入對數(shù)生長期，在第5d生長最為旺盛，之后增殖減慢逐漸進入平臺期。 5.蛔蟲感染34天時各組CTL，對B16細胞的生