新型CpG免疫刺激分子的構(gòu)建及其免疫活性研究.pdf

1、為探索安全高效的新型動(dòng)物分子免疫增強(qiáng)劑，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了一新型CpG寡聚脫氧核苷酸(oligodeoxynucleotide，ODN)，包含11個(gè)CpG基序，同時(shí)設(shè)計(jì)一對(duì)引物，在其兩端引入PstⅠ酶切位點(diǎn)。應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增CpGODN，回收純化后以MTT法體外檢測(cè)其對(duì)動(dòng)物血液淋巴細(xì)胞的刺激增殖活性。用離子交聯(lián)法制備了殼聚糖納米顆粒(CNP)，探索了CNP包裝CpG和介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞的特征。用此CNP包裹CpGODN，聯(lián)合副傷寒疫苗或

2、單獨(dú)接種21日齡昆明小鼠后，每周尾靜脈采血用ELISA分析免疫小鼠IgG、IgA、IgM、IL2、IL4和IL6水平，檢測(cè)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)量的變化，，觀察此CpGODN及其殼聚糖納米顆粒包裝后對(duì)小鼠免疫應(yīng)答及免疫保護(hù)的調(diào)節(jié)作用。接著將此CpG用PstⅠ酶切后與質(zhì)粒VR1012連接，構(gòu)建新型免疫刺激分子CpG-VR1012。酶切鑒定結(jié)果表明CpG分子與VR1012連接成功。同樣制備殼聚糖納米顆粒并免疫小鼠。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)