脂多糖通過ERK1-2-PPARγ途徑上調(diào)adipophilin表達(dá)促進(jìn)巨噬細(xì)胞炎癥因子分泌.pdf

1、【目的】闡明adipophilin在LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)過程中的作用，探討 adipophilin與 M1型巨噬細(xì)胞的關(guān)系。
　　【方法】首先，觀察adipophilin在LPS誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞中表達(dá)變化情況，用Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)adipophilin、iNOS和Arg-1的蛋白含量， ELISA檢測細(xì)胞上清液中促炎因子TNF-α、MCP-1、IL-6的分泌情況；然后，分別用ERK1/2特異性抑制劑PD

2、98059和PPARγ特異性抑制劑T0070907預(yù)處理RAW264.7細(xì)胞6小時后，用100ng/ml的LPS處理細(xì)胞12小時，Western Blot檢測細(xì)胞內(nèi)adipophilin、iNOS、PPARγ和ERK1/2蛋白含量，ELISA檢測上清液中TNF-α、MCP-1、IL-6變化情況；最后，利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染技術(shù)，構(gòu)建穩(wěn)定沉默adipophilin的RAW264.7細(xì)胞，加入處理因素LPS后，用上述方法檢測相關(guān)蛋白表達(dá)和炎

3、癥因子分泌情況。
　　【結(jié)果】當(dāng)用不同濃度LPS處理RAW264.7巨噬細(xì)胞12小時，adipophilin蛋白表達(dá)呈濃度依賴性的增高，篩選出細(xì)胞處理濃度100ng/ml；LPS處理RAW264.7巨噬細(xì)胞不同時間后adipophilin蛋白含量先增加后降低，且在12小時達(dá)到最高值，同時，炎癥因子 TNF-α、MCP-1、IL-6的濃度變化情況與adipophilin變化一致，也是先增加后下降，在12小時時達(dá)到最高值；當(dāng)用ERK1

4、/2特異性抑制劑PD98059處理細(xì)胞后，與對照組相比，處理組中adipophilin、PPARγ蛋白表達(dá)和炎癥因子TNF-α、MCP-1、IL-6的濃度都明顯減少；而用PPARγ特異性抑制劑T0070907處理細(xì)胞后，與對照組相比， ERK1/2活性并無明顯變化，但adipophilin蛋白表達(dá)和炎癥因子 TNF-α、MCP-1、IL-6的濃度都顯著增加；將 LPS加入沉默 adipophilin細(xì)胞中時，與對照組相比， ERK1/2

5、活性和 PPARγ蛋白表達(dá)都無明顯變化，然而炎癥因子TNF-α、MCP-1、IL-6濃度卻明顯降低。此外，在整個實(shí)驗過程中，檢測到adipophilin與M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物iNOS和TNF-α的變化情況幾乎一致，但在加入ERK1/2抑制劑時iNOS并無明顯變化，提示 adipophilin與 M1型巨噬細(xì)胞關(guān)系密切。
　　【結(jié)論】LPS通過ERK1/2-PPARγ途徑上調(diào) adipophilin表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)巨噬細(xì)胞內(nèi)炎癥因子T