鎘通過GPER1-ERK-AKT-NF-κB通路促進甲狀腺癌細胞增殖.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究鎘促進甲狀腺癌WRO和FRO細胞增殖的分子機制及G蛋白偶聯(lián)雌激素受體1(GPER1/GPR30)在其中的作用。
  方法:Western blot檢測MCF-7、WRO及FRO三種細胞系GPER1的表達;將WRO和FRO細胞分別分為7組進行處理:空白對照組、鎘(Cd)(250、500、750及1000 nM)處理組、17β-雌二醇(E2)(10 nM)處理組和GPER1特異性激動劑(G1)(10 nM)處理組, MTT法

2、檢測細胞增殖;將WRO和FRO細胞分別分組并進行處理:(1)空白對照組、Cd(5、10、15及30 min)處理組、E2(15 min)處理組和G1(15 min)處理組;(2)空白對照組、Cd(1、3、6及12 h)處理組、E2(12 h)處理組和G1(12 h)處理組;(3)空白對照組、GPER1特異性拮抗劑(G15)處理組、Cd+G15處理組、E2處理組和E2+G15處理組;(4)空白對照組、Cd處理組、Cd+scramble s

3、iRNA處理組和Cd+GPER1-siRNA處理組;Western blot檢測(1)、(3)及(4)中各組p-ERK和t-ERK及p-AKT和t-AKT水平;Western blot檢測(2)、(3)及(4)中各組細胞核NF-κB(p65)的水平及細胞中Cyclin A和 Cyclin D1的表達水平;將WRO和FRO細胞分為7組進行處理:空白對照組、Cd處理組、Cd+G15處理組、Cd+ERK抑制劑(PD98059)處理組、Cd+A

4、KT抑制劑(LY294002)處理組、Cd+NF-κB抑制劑(PDTC)處理組和Cd+GPER1-siRNA處理組,MTT法檢測細胞增殖。
  結(jié)果:WRO和FRO均為GPER1陽性細胞;低濃度Cd促進WRO和FRO細胞增殖(P<0.05),500 nM Cd效果最明顯;隨著Cd處理時間延長,ERK和AKT蛋白磷酸化水平升高(P<0.05),15 min時最高;隨著Cd處理時間延長,胞核中NF-κB(p65)水平及細胞中Cycli

5、n A和Cyclin D1的表達上升(P<0.05);G15或GPER1-siRNA抑制Cd或E2誘導的ERK和AKT磷酸化水平升高(P<0.05),抑制Cd或E2誘導的胞核中NF-κB(p65)水平升高及細胞中Cyclin A和 Cyclin D1的表達上升(P<0.05);G15、LY294002、PD98059、PDTC及GPER1-siRNA減弱Cd誘導的細胞增殖(P<0.05)。
  結(jié)論:鎘通過 GPER1-ERK/A

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