陰溝腸桿菌耐藥機制的研究.pdf

1、[目的]
　　 在明確陰溝腸桿菌耐藥現狀的基礎上，闡明整合子的流行現狀、分布(定位)及耐藥基因盒種類；并進一步探明CTX-M型ESBLs與qnr基因的流行狀況，探討整合子、CTX-M型ESBLs、qnr基因與耐藥性的關系，為合理使用抗生素，控制耐藥菌株播散提供理論依據。
　　 [方法]
　　 1.采用全自動微生物分析儀(VITEK32)鑒定細菌。
　　 2.抗生素敏感性試驗：采用紙片擴散法(K-B法)測定

2、70株陰溝腸桿菌對18種抗生素的敏感性；采用瓊脂稀釋法測定70株陰溝腸桿菌對4種抗生素的最小抑菌濃度。
　　 3.PCR擴增陰溝腸桿菌質粒和染色體上的整合子及整合子陽性株中的可變區(qū)耐藥基因，并做測序分析。
　　 4.PCR擴增質粒上的qnr基因，并做測序分析。
　　 5.采用雙紙片協同法篩選ESBLs陽性菌株。PCR擴增陰溝腸桿菌質粒和染色體上的CTX-M型ESBLs基因，并做測序分析。
　　 [結果]<

3、br>　　 1.共分離出70株陰溝腸桿菌，主要的標本來源為痰液、尿液和血液，分別占標本來源的52.9％、17.6％和11.8％。陰溝腸桿菌對亞胺培南和美羅培南的耐藥率最低，均100％敏感，耐藥率最高的是頭孢唑林和氨芐青霉素，也均為100％，其他抗生素均表現出不同程度耐藥。
　　 2.70株陰溝腸桿菌中有47株檢測到Ⅰ類整合子，陽性率為67.14％，僅在染色體DNA中檢測到Ⅰ類整合子的有9株，陽性率為12.85％，占陽性株的19

4、.15％；僅在質粒DNA中檢測到Ⅰ類整合子有10株，陽性率為14.29％，占陽性株的21.28％；同時在染色體DNA和質粒DNA上都檢測到Ⅰ類整合酶的有28株，陽性率為40％，占陽性株的59.57％。即在染色體DNA上的檢出率為52.86％(37/70)，而在質粒上的檢出率為54.29％(38/70)。未檢測出Ⅱ類整合子。
　　 3.頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢西丁、頭孢他啶、頭孢哌酮/舒巴坦、環(huán)丙沙星、慶大霉素和丁胺卡那在整合子陽

5、性組中的耐藥率明顯高于整合子陰性組，耐藥率差別有統(tǒng)計學意義；頭孢唑啉、哌拉西林/他唑巴坦、左旋氧氟沙星的耐藥率在兩組的差別則無統(tǒng)計學意義。
　　 4.ESBLs的陽性率為58.57％(41/70)，ESBLs陽性菌株耐藥率整體比陰性菌株高。在產ESBLs的陰溝腸桿菌中，同時在染色體和質粒DNA上、僅在染色體DNA上和僅在質粒DNA上檢測到Ⅰ類整合子的比例分別為56.10％、14.63％和9.76％；Ⅰ類整合子陰性的占19.51％

6、。即在產ESBLs中有80.49％攜帶Ⅰ類整合子。
　　 5.分別以Ⅰ類整合子陽性株質粒DNA和染色體DNA為模板進行PCR擴增Ⅰ類整合子可變區(qū)，分別有45株和47株陽性。攜帶大小不等的基因，其中有些陽性株含有多個基因。
　　 6.本地區(qū)陰溝腸桿菌攜帶的整合子含耐氨基糖苷類抗生素基因aadA2(攜帶率55.31％)和aadB，耐甲氧芐氨嘧啶抗生素基因dfrA12(65.96％)和dhfrⅫ，耐β-內酰胺類基因blaIMP

7、-4和耐氯霉素基因catB3。陰溝腸桿菌對氨基糖苷和甲氧芐氨嘧啶類抗生素的耐藥率和耐藥基因攜帶率相對應。
　　 7.qnr基因陽性率為35.71％，其中，qnrA基因、qnrB基因和qnrS基因陽性率分別為5.71％、22.86％和7.14％。qnr基因陽性株中有88％產ESBLs，其中，qnrA、qnrB和qnrS陽性株產ESBLs的比例分別為16％、64％和8％；qnr基因陽性株攜帶Ⅰ類整合子的比例為80％。qnrA、qnr

8、B和qnrS基因陽性株中Ⅰ類整合子陽性的比例分別為12％、52％和16％。
　　 8.頭孢吡肟、氨曲南、復方新諾明、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、丁胺卡那和哌拉西林/他唑巴坦在qnr基因陽性組中的耐藥率明顯高于qnr基因陰性組，耐藥率差別有統(tǒng)計學意義。
　　 9.70株陰溝腸桿菌中，有24株檢測到CTX-M型ESBls基因，陽性率為34.29％，占ESBLs陽性株的58.54％。CTX-M-1型酶、CTX-M-9型酶和CTX-M-

9、25型酶陽性株分別有17株，8株和4株。有些陽性菌株同時含幾個群或者在質粒和染色體上同時含有一個群。CTX-M-1型酶、CTX-M-9型酶和CTX-M-25型酶陽性株分別有47.06％、37.50％和25％攜帶Ⅰ類整合子。
　　 10.在CTX-M型酶陽性株中，有7株qnr基因陽性，陽性率為29.17％。在CTX-M-1型酶陽性株中，含qnr基因有4株；在CTX-M-9型酶陽性株中，含qnrB基因有2株；在同時含有CTX-M-2

10、5、CTX-M-1的陽性株中，含qnrA基因有1株。
　　 11.頭孢噻肟、頭孢西丁、頭孢他啶、環(huán)丙沙星、諾氟沙星和復方新諾明在CTX-M型ESBLs陽性組中的耐藥率明顯高于CTX-M型ESBLs陰性組。差別有統(tǒng)計學意義。
　　 [結論]
　　 1.陰溝腸桿菌主要引起呼吸道、尿路感染，血液感染有增加的趨勢；其多重耐藥趨勢明顯，耐藥情況嚴重。
　　 2.陰溝腸桿菌Ⅰ類整合子陽性株比陰性株更容易產生耐藥，同時

11、在質粒和染色體上攜帶Ⅰ類整合子的現象常見，提示耐藥基因在陰溝腸桿菌中水平播散和垂直傳播的潛力較大。
　　 3.整合子可變區(qū)攜帶的耐藥基因以耐氨基糖苷類和耐甲氧芐氨嘧啶抗塵素基因為主。
　　 4.本地區(qū)陰溝腸桿菌攜帶的qnr基因以qnrB基因為主，qnr基因陽性株產ESBLs和攜帶常見Ⅰ類整合子常見。
　　 5.本地區(qū)陰溝腸桿菌攜帶的CTX-M型ESBLs以CTX-M-1型酶為主，并主要存在染色體上。CTX-M型E