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1、為了更方便、直觀地優(yōu)化對造血干/祖細胞或鼠紅白血病細胞的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)條件和檢測外源性基因的表達,我們構(gòu)建了以EGFP基因為標記基因的反轉(zhuǎn)錄病毒載體,并從轉(zhuǎn)染效率、轉(zhuǎn)導(dǎo)效率及EGFP的表達等方面比較了CMV及SV40啟動子對EGFP表達的影響.結(jié)果表明:1.成功構(gòu)建了攜帶外源CMV啟動子及EGFP基因的反轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXCG,并與以往構(gòu)建的攜帶SV40啟動子及EGFP基因的反轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSE作了比較.從轉(zhuǎn)染效率、轉(zhuǎn)導(dǎo)效率及EGFP的表
2、達等方面的分析顯示CMV啟動子促進EGFP表達的作用更強,pLXCG是進行體外富集轉(zhuǎn)基因細胞的理想載體.2.用所構(gòu)建的pLXCG及β基因重組體經(jīng)高效包裝細胞系GP-293包裝,以VSV-G作為包膜蛋白,獲得了高滴度的病毒.3.以pLXCG為基本框架,構(gòu)建了3個β基因理組體:pLXCGHS2Δβ2.0(340bp)、pLXCGHS32Δβ2.0(1.1kb)、pLXCGHS3Δβ2.0(780bp).以重組病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)MEL細胞,FACS分析
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