睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和綠色熒光蛋白共表達(dá)的重組腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè)，還剩41頁(yè)未讀， 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的：構(gòu)建睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)基因和綠色熒光蛋白(GFP)共表達(dá)的腺相關(guān)病毒載體，獲得高效的腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)基因平臺(tái)。 方法：設(shè)計(jì)與合成CNTF蛋白編碼區(qū)兩端的引物，高保真酶擴(kuò)增CNTF蛋白編碼區(qū)序列。采用限制性內(nèi)切酶酶切、T4DNA連接酶連接等方法，將CNTF基因插入腺相關(guān)病毒載體pAAV-IRES-hrGFP中，構(gòu)建CNTF和GFP共表達(dá)的腺相關(guān)病毒載體(pAAV-CNTF-IRES-hrGFP)。在脂質(zhì)體介導(dǎo)下，與包裝

2、質(zhì)粒pAAV-RC和輔助質(zhì)粒pHelper共轉(zhuǎn)染來(lái)源于人胚腎細(xì)胞系的包裝細(xì)胞-AAV-293細(xì)胞，包裝產(chǎn)生腺相關(guān)病毒(rAAV-CNTF)；收集病毒顆粒，感染體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)。熒光顯微鏡下觀察GFP的表達(dá)。 結(jié)果：1.pAAV-CNTF-IRES-hrGFP質(zhì)粒通過PCR法和SalI/BamHI雙酶切分析鑒定，結(jié)果表明插入目的DNA片段與預(yù)期結(jié)果一致，進(jìn)一步DNA測(cè)序結(jié)果表明插入片段為CNTF目的基因，且

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論