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文檔簡介
1、胃癌的侵襲性轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后最重要的因素，迫切需要尋找有效的治療手段?，F(xiàn)階段關(guān)于胃癌侵襲性轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因、蛋白研究已經(jīng)取得巨大進(jìn)展，但是胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移除了與腫瘤本身的特性有關(guān)外，還與機(jī)體的免疫功能狀態(tài)密切相關(guān)，這可能是胃癌治療未取得明顯進(jìn)展的原因之一。本研究擬用能表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的真核表達(dá)載體pEGFP-C1轉(zhuǎn)染小鼠前胃癌細(xì)胞(MFC)株，篩選出能穩(wěn)定表達(dá)增強(qiáng)性綠色熒光蛋白的細(xì)胞株，建立小鼠胃癌原位移植模型。運(yùn)用熒光技術(shù)對模型中
2、胃癌的生長及其轉(zhuǎn)移進(jìn)行觀察研究，為進(jìn)一步運(yùn)用免疫熒光技術(shù)分析胃癌侵襲性轉(zhuǎn)移與機(jī)體免疫功能狀態(tài)變化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1．真核表達(dá)載體pEGFP-C1的篩選、鑒定、擴(kuò)增、純化。 2．應(yīng)用PolyFect Transfection Reagent將純化的pEGFP-C1轉(zhuǎn)染入小鼠前胃癌細(xì)胞株(MFC)。利用熒光顯微鏡監(jiān)測pEGFP-C1在小鼠前胃癌細(xì)胞中表達(dá)，運(yùn)用G418試劑篩選能穩(wěn)定表達(dá)pEGFP-C1的小鼠前
3、胃癌細(xì)胞株。 3．建立小鼠胃癌原位移植模型，監(jiān)測腫瘤生長情況及其轉(zhuǎn)移情況，利用熒光顯微鏡對轉(zhuǎn)移灶及可疑轉(zhuǎn)移灶進(jìn)行監(jiān)測。 結(jié)果： 1．成功的對真核表達(dá)載體pEGFP-C1進(jìn)行篩選、鑒定、擴(kuò)增、純化。 2．體外培養(yǎng)小鼠前胃癌細(xì)胞株(MFC)，給予轉(zhuǎn)染pEGFP-C1真核表達(dá)載體，利用熒光顯微鏡，證實(shí)轉(zhuǎn)染成功，有目的基因表達(dá)。 3．通過對成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株進(jìn)行G418篩選，得到能穩(wěn)定表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白
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