傷寒特異性轉(zhuǎn)移因子口服制劑的制備和檢定.pdf

1、目的:探討傷寒特異性轉(zhuǎn)移因子(T-STF)口服制劑的制備工藝，檢定其理化性質(zhì)、毒副反應(yīng)和免疫學(xué)活性，以期成功研發(fā)一種用于緊急預(yù)防和生物治療傷寒沙門菌感染的新生物制劑。 方法: 1．傷寒沙門菌弱毒株H<,901>和O<,901>經(jīng)過形態(tài)、染色、生化、血清學(xué)鑒定后，培養(yǎng)細(xì)菌制備傷寒沙門菌免疫原：按兩種不同免疫程序免疫家兔，免疫成功后取淋巴組織勻漿透析法制備T-STF口服制劑。 2．T-STF口服制劑進(jìn)行光密度、pH、

2、核糖、多肽和蛋白質(zhì)的理化指標(biāo)測定。以及無菌試驗、熱原質(zhì)試驗和安全試驗。 3．無菌試驗、熱原質(zhì)試驗和安全試驗嚴(yán)格按照2000版《中國生物制品規(guī)程》要求檢測。 4．T-STF口服制劑免疫學(xué)活性檢定，用MTT法測定小鼠脾T、B淋巴細(xì)胞的增殖率(SI)；用白細(xì)胞粘附抑制試驗(LAIT)測定粘附抑制率；傷寒毒株攻擊后，觀察小鼠一般情況和3d和7d的存活率，并觀察空回腸病理學(xué)改變。檢測小鼠外周血中性粒細(xì)胞的吞噬率和腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬

3、率。 結(jié)果: 1．淋巴組織T-STF口服制劑理化性質(zhì)，符合質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。兩免疫組淋巴組織T-STF多肽和核糖的含量明顯低于肝臟T-STF，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，兩組間淋巴組織T-STF比較無差異(P>0.05)。 2．無菌試驗、熱原性試驗和安全試驗檢定結(jié)果均為陰性。 3.T-STF口服制劑濃度為0/05mg/ml時淋巴細(xì)胞的增值率(SI)顯著高于其它濃度組，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

4、4．T-STF組白細(xì)胞粘附抑制率為50.04±7.71％，明顯高于nTF組的抑制率 23.10±3.94％和NS組的抑制率15.08±3.40％，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。 5．傷寒毒株攻擊后，小鼠3d存活率T-STF組和nTF組比較無顯著差異(P>0.05)，且均明顯高于NS組，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，小鼠7d存活率T-STF組和nTF組比較有差異(P<0.05),且均明顯高于NS組，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

5、 6．T-STF組回腸病理學(xué)觀察輕度炎癥，局部淋巴組織增生，以及巨噬細(xì)胞略增生。 7．小鼠口服T-STF與nTF后均可顯著提高中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的吞噬功能(P<0.01)。 結(jié)論: 1．成功制備T-STF口服制劑，并進(jìn)行動物免疫程序、組織細(xì)胞處理、透析等制備工藝的探討，其理化性質(zhì)測定符合質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 2．T-STF口服制劑經(jīng)無菌試驗、熱原質(zhì)試驗及安全試驗檢定證實：安全且無毒副反應(yīng)。 3．