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1、目的: 不同類(lèi)型的腫瘤具有特征性的DNA甲基化模式,檢測(cè)基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)有助于腫瘤的診斷,還可以作為預(yù)測(cè)療效和判斷預(yù)后的分子標(biāo)志[1]。已有研究表明雌激素受體(包括ERα和ERβ亞型)基因啟動(dòng)子在乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌等腫瘤中具有特征性的甲基化模式[2-4],而在白血病中是否也具有特征性的甲基化模式,國(guó)內(nèi)還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)利用MSP方法、RT-PCR和免疫組化技術(shù)檢測(cè)白血病中ERa基因啟動(dòng)子(ERα-A、ERα-B
2、)和ERβ基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài),以及ERα與ERβ的mRNA和蛋白表達(dá)的異常情況;同時(shí)觀察肼苯噠嗪對(duì)ERα基因啟動(dòng)子去甲基化效果,以及ERα表達(dá)復(fù)活的狀況。從而揭示白血病中ER基因啟動(dòng)子甲基化變化情況與基因表達(dá)的關(guān)系,并探討肼苯噠嗪治療白血病的潛在價(jià)值。 方法: 1.白血病細(xì)胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat的培養(yǎng)以及肼苯噠嗪對(duì)細(xì)胞株的處理。 2.應(yīng)用MSP檢測(cè)白血病細(xì)胞株和正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞中ER
3、α-A、ERα-B和ERβ基因啟動(dòng)子CpG島的甲基化狀態(tài)。 3.應(yīng)用RT-PCR和免疫組化技術(shù)檢測(cè)白血病細(xì)胞株ERα和ERβ的mRNA和蛋白表達(dá)。 4.運(yùn)用MSP、RT-PCR和免疫組化技術(shù)檢測(cè)肼苯噠嗪處理后白血病細(xì)胞株中ERα-A、ERα-BCpG島甲基化狀態(tài)以及ERα的mRNA和蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果: 1.在白血病細(xì)胞HL-60、MOLT-4、Jurkat中ERα基因啟動(dòng)子ERα-A、ERα-B均檢
4、出甲基化,ERβ啟動(dòng)子為非甲基化,而正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞中ERα與ERβ啟動(dòng)子區(qū)均為非甲基化。 2.在白血病細(xì)胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat中,ERα完全失表達(dá),而ERβ存在mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)。 3.肼苯噠嗪處理HL-60、MOLT-4、Jurkat后,ERα基因啟動(dòng)子ERα-A、ERα-B的CpG島均發(fā)生去甲基化并檢測(cè)到ERα恢復(fù)mRNA和蛋白表達(dá)。 結(jié)論: 1.ER的兩種亞型ERα和
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