白血病細胞雌激素受體啟動子甲基化的實驗研究.pdf

1、目的: 不同類型的腫瘤具有特征性的DNA甲基化模式，檢測基因啟動子甲基化狀態(tài)有助于腫瘤的診斷，還可以作為預測療效和判斷預后的分子標志[1]。已有研究表明雌激素受體(包括ERα和ERβ亞型)基因啟動子在乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌等腫瘤中具有特征性的甲基化模式[2-4]，而在白血病中是否也具有特征性的甲基化模式，國內(nèi)還未見相關(guān)報道。本實驗利用MSP方法、RT-PCR和免疫組化技術(shù)檢測白血病中ERa基因啟動子(ERα-A、ERα-B

2、)和ERβ基因啟動子的甲基化狀態(tài)，以及ERα與ERβ的mRNA和蛋白表達的異常情況；同時觀察肼苯噠嗪對ERα基因啟動子去甲基化效果，以及ERα表達復活的狀況。從而揭示白血病中ER基因啟動子甲基化變化情況與基因表達的關(guān)系，并探討肼苯噠嗪治療白血病的潛在價值。 方法: 1.白血病細胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat的培養(yǎng)以及肼苯噠嗪對細胞株的處理。 2.應用MSP檢測白血病細胞株和正常人外周血單個核細胞中ER

3、α-A、ERα-B和ERβ基因啟動子CpG島的甲基化狀態(tài)。 3.應用RT-PCR和免疫組化技術(shù)檢測白血病細胞株ERα和ERβ的mRNA和蛋白表達。 4.運用MSP、RT-PCR和免疫組化技術(shù)檢測肼苯噠嗪處理后白血病細胞株中ERα-A、ERα-BCpG島甲基化狀態(tài)以及ERα的mRNA和蛋白表達的變化。 結(jié)果: 1.在白血病細胞HL-60、MOLT-4、Jurkat中ERα基因啟動子ERα-A、ERα-B均檢

4、出甲基化，ERβ啟動子為非甲基化，而正常人外周血單個核細胞中ERα與ERβ啟動子區(qū)均為非甲基化。 2.在白血病細胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat中，ERα完全失表達，而ERβ存在mRNA表達和蛋白表達。 3.肼苯噠嗪處理HL-60、MOLT-4、Jurkat后，ERα基因啟動子ERα-A、ERα-B的CpG島均發(fā)生去甲基化并檢測到ERα恢復mRNA和蛋白表達。 結(jié)論: 1.ER的兩種亞型ERα和