IDO基因修飾的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)免疫耐受的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)基因修飾的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(IDO-BMSC)體外誘導(dǎo)免疫耐受作用，并探討其相關(guān)的免疫學(xué)機(jī)制。
　　 方法：C57BL/6小鼠的BMSC與BALB/C小鼠骨髓來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)和脾臟單個(gè)核細(xì)胞(Splenic mononuclear cells，SMC)在體外按不同細(xì)胞比例共同培養(yǎng)4天。根據(jù)BMSC中IDO基因修飾與否，將實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組和基因修飾組，對(duì)照組和基因修飾組均設(shè)：A組

2、：BMSC與DC共同培養(yǎng)(1∶1)，B組：BMSC與SMC共同培養(yǎng)(1∶4)，C組：BMSC與SMC共同培養(yǎng)(1∶8)，D組：BMSC與SMC共同培養(yǎng)(1∶16)，E組：BMSC與DC、SMC共同培養(yǎng)(BMSC∶SMC=1∶4)，F(xiàn)組：BMSC與DC、SMC共同培養(yǎng)(BMSC:SMC=1：8)，G組：BMSC與DC、SMC共同培養(yǎng)(BMSC：SMC=1：16)，培養(yǎng)體系中均加入(1ug/ml)的脂多糖(LPS)。流式細(xì)胞術(shù)分析共培養(yǎng)前后

3、樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子表型變化及脾臟單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3+Treg含量。微量樣本多指標(biāo)流式蛋白定量技術(shù)(CBA)檢測(cè)共培養(yǎng)上清中IL-2，IL-4，IL-6，IFN-γ，IL-17，IL-10的濃度。高效液相(HPLC)法檢測(cè)上清中色氨酸及犬尿氨酸濃度。RT-PCR檢測(cè)A、E組DC中IDOmRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)BMSC與DC細(xì)胞以1：1的比例共培養(yǎng)(A組)，對(duì)照組DC與未成熟DC表型相似，而基因修飾組較對(duì)照組能明顯抑

4、制DC成熟(P＜0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)B、C、D組中FoxP3+Treg含量比較，基因修飾組FoxP3+Treg高于對(duì)照組(P＜0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；E、F、G組中FoxP3+Treg含量增加，基因修飾組高于對(duì)照組，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)組間比較B、C、D組，基因修飾組較對(duì)照組IL-2，IL-6，IFN-γ，IL-17明顯下降，而IL-4及IL-10明顯上升，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組間比較E、F、G組，基

5、因修飾組IL-2，IL-6明顯下降，而IL-4，IFN-γ明顯升高，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IL-17，IL-10改變不明顯，P＞0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)基因修飾組IDO活性明顯高于對(duì)照組，P＜0.05。且在基因修飾組，E組IDO活性明顯高于A組，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)基因修飾的E組中的DC中檢測(cè)出IDOmRNA的表達(dá)，對(duì)照組無(wú)IDOmRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)論：IDO基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能通過(guò)以下四