曲古抑菌素A聯(lián)合多西他賽對(duì)肺腺癌A549凋亡和α-tubulin的影響.pdf

1、目的:研究曲古抑菌素A(trichostatinA，TSA)聯(lián)合多西他賽(Docetaxel，Doc)對(duì)肺腺癌細(xì)胞株A549凋亡和α-tubulin的影響，以及caspase-3及survivin蛋白表達(dá)情況。
　　 方法:人肺腺癌A549細(xì)胞株培養(yǎng)于PRMI1640培養(yǎng)液中，按照分組:1、空白對(duì)照組2、TSA250nmol/L3、Docetaxel10ug/mL4、TSA250nmol/L+Docetaxel10μg/mL，藥

2、物處理24h后，光學(xué)顯微鏡觀察不同處理組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定細(xì)胞抑制率、Hoechst33258染色法顯示細(xì)胞凋亡、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡及周期的變化;免疫細(xì)胞熒光化學(xué)檢測(cè)Acetyl-α-tubulin蛋白的表達(dá)變化;Westernblot檢測(cè)Acetyl-α-tubulin、survivin蛋白及caspase-3的變化。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，SPSS15軟件進(jìn)行x2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)，p＜0.05為差異有統(tǒng)

3、計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:1、光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
　　 ①Control:細(xì)胞貼壁緊密，細(xì)胞與細(xì)胞之間邊界清晰，無(wú)懸浮死細(xì)胞。
　　 ②TSA250nmol/L:細(xì)胞變大或有星狀細(xì)胞出現(xiàn)，細(xì)胞間隙增寬，偶可見懸浮死細(xì)胞。
　　 ③Docetaxel10μg/mL:細(xì)胞變小變圓，可見懸浮死細(xì)胞。
　　 ④TSA250nmol/L+Docetaxel10μg/mL:與對(duì)照組及單獨(dú)用藥組相比，

4、細(xì)胞明顯皺縮變圓，同時(shí)可見大量懸浮死細(xì)胞。
　　 2、四甲基偶氮唑鹽（MTT法）檢測(cè)不同分組對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用
　　 藥物處理24h，Docetaxel對(duì)A549細(xì)胞的抑制作用具有濃度依賴性，聯(lián)合TSA250nmol/L與單一用藥相比抑制率明顯增加;Docetaxel10μg/mL、TSA250nmol/L細(xì)胞抑制率分別為(30.6±2.5)％、(10.5±1.2)％，Docetaxel10μg/mL+TSA250nm

5、ol/L組抑制率(65.6±3.5)％，明顯高于單藥組(p＜0.05)。
　　 3、Hoechst33258染色法觀察藥物處理后細(xì)胞核的變化
　　 按照不同分組藥物處理細(xì)胞24h，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核變化，凋亡細(xì)胞核出現(xiàn)染色質(zhì)凝聚，染色強(qiáng)度增強(qiáng)，呈致密濃染的塊狀或顆粒狀熒光以及凋亡小體形成，與單一用藥及對(duì)照組相比，聯(lián)合用藥組細(xì)胞凋亡明顯增加。
　　 4、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期
　　 Annex

6、inV/PI結(jié)果顯示:
　　 ①Control:(1.2±0.5)％
　　 ②TSA250nmol/L:(17.6±1.8)％
　　 ③Docetaxel10μg/mL:(39.2±3.7)％
　　 ④TSA250nmol/L+Docetaxel10μg/mL:(64.2±4.2)％
　　 聯(lián)合用藥后細(xì)胞凋亡率明顯增加，G2/M期阻滯更加明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5、免疫熒光細(xì)胞化

7、學(xué)檢測(cè)Acetyl-α-tubulin蛋白的表達(dá)的變化
　　 TSA(250nmol/L)、Docetaxel(10μg/mL)單獨(dú)或聯(lián)合處理細(xì)胞24h后，顯微鏡下觀察Acetyl-α-tubulin蛋白的變化，同一曝光度下，可以看出TSA與Docetaxel聯(lián)合處理組胞漿Acetyl-α-tubulin蛋白表達(dá)與對(duì)照組及單獨(dú)藥物處理組相比，熒光強(qiáng)度明顯增加。
　　 6、TSA與Docetaxel聯(lián)合對(duì)Acetyl-α-

8、tubulin、caspase-3和survivin表達(dá)的影響
　　 TSA(250nmol/L)與Docetaxel(10μg/mL)單獨(dú)或聯(lián)合處理細(xì)胞24h后，與單獨(dú)藥物處理組及對(duì)照組相比，TSA聯(lián)合Docetaxel可促使α-tubulin乙?；p少survivin蛋白的表達(dá)以及使活化casapase-3增加。
　　 結(jié)論:曲古抑菌素A聯(lián)合多西他賽具有協(xié)同作用，可能機(jī)制是促進(jìn)細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)G2/M期阻滯，促使α-