肝移植術(shù)后FK506濃度、T細胞亞群水平與外周血單個核細胞內(nèi)HBV DNA的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：①分析乙肝相關(guān)終末期肝病肝移植術(shù)后FK506的濃度與T淋巴細胞亞群之間的關(guān)系；②外周血單個核細胞(PBMC)中的HBV DNA含量與T淋巴細胞亞群的水平之間的相關(guān)性。初步探討其三者之間的相互關(guān)系，對肝移植術(shù)后使用FK506個體化方案預(yù)防乙肝復(fù)發(fā)提供理論依據(jù)。
　　 方法：用熒光標記單克隆抗體結(jié)合流式細胞技術(shù)檢測健康對照組(20例)、慢性乙型肝炎對照組(20例)、乙肝相關(guān)終末期肝病肝移植FK506治療組(23例)術(shù)后4、8、

2、12、16周的外周血T細胞亞群：CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD8+CD152+的百分比。用實時熒光定量PCR檢測乙肝相關(guān)終末期肝病肝移植后4、8、12、16周PBMC內(nèi)的HBV DNA。肝移植FK506治療組在術(shù)后第4、8、12、16周檢測FK506的濃度，并據(jù)此分別稱為FK506治療4周組、FK506治療8周組、FK506治療12周組、FK506治療16周組并把每組分為FK506高濃度

3、組和FK506低濃度組。實驗結(jié)果采用SPSS13.0分析軟件進行統(tǒng)計分析處理。對正態(tài)分布數(shù)據(jù)，兩組數(shù)據(jù)間的比較采用t檢驗進行分析比較，多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析，用Tamhane檢驗進行組間兩兩比較；非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用Kruskal Wallis Test進行多組間比較，以P＜0.05描述統(tǒng)計有顯著差異。肝移植術(shù)后T細胞亞群與PBMC內(nèi)的HBV DNA的關(guān)系采用多元線性回歸分析。
　　 結(jié)果：①、肝移植術(shù)后FK506治療組

4、的CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD8+CD28+的百分比計數(shù)及CD8+CD28+/CD8+CD28-的比值比健康對照組比較均明顯下降而CD8+CD28-、CD8+CD152+的百分比計數(shù)則顯著升高(P＜0.05)，均有統(tǒng)計學(xué)意義。 FK506治療組的CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD8+CD28+的百分比計數(shù)及CD8+CD28+/CD8+CD28-的比值與慢性乙型肝炎對照組比較均明顯下降而CD8+CD152+的百分比計數(shù)則

5、明顯升高(P＜0.05)，均有統(tǒng)計學(xué)意義。肝移植術(shù)后FK506濃度隨時間的延長而逐漸減低，其中4周和12、16周，8周和16周，12周和16周組間FK506濃度差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；肝移植術(shù)后CD8+CD28+、CD8+CD28+/CD8+CD28-的比值隨FK506濃度的降低而逐漸回升，而CD8+CD28-、CD8+CD152+則相反，其中術(shù)后4周和12、16周組間的CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD8+CD15

6、2+的百分比及CD8+CD28+/CD8+CD28-的比值變化有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。肝移植術(shù)后4、8、12周組內(nèi)的FK506高濃度組(≥9ng/ml)的CD3+CD4+、CD8+CD28+、CD8+CD28+/CD8+CD28-比值均明顯低于低濃度組(＜9ng/ml)有統(tǒng)計學(xué)意義，其P值均＜0.05；而CD8+CD152+則明顯高于低濃度組。在術(shù)后4、8周組內(nèi)的高濃度組CD8+CD28-明顯高于低濃度組(P＜0.05)。②、肝移

7、植術(shù)后4、8、12周組內(nèi)的FK506高濃度組的PBMC內(nèi)的HBV DNA均明顯高于低濃度組，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。③、用多元線性回歸分析PBMC內(nèi)的HBV DNA與CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD8+CD152+的相關(guān)性，我們發(fā)現(xiàn)CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD8+CD152+與HBV DNA密切相關(guān)，其決定系數(shù)為R2=0.795，根據(jù)回歸方程分析結(jié)果認為PBMC內(nèi)的H

8、BV DNA與CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD8+CD152+呈直線相關(guān)，其中與CD8+CD28-、CD8+CD152+呈正相關(guān)，與CD8+CD28+呈負相關(guān)。
　　 結(jié)論：①FK506濃度變化對CD8+CD28+、CD8+CD28-及CD8+CD28+/CD8+CD28-比值的影響比CD3+CD4+、CD3+CD8+T細胞更為敏感。②FK506濃度對乙肝相關(guān)終末期肝病肝移植術(shù)后PBMC內(nèi)的HBV DNA拷貝數(shù)有影響