外周血樹突狀細(xì)胞與T細(xì)胞亞群在肝移植中應(yīng)用價(jià)值的臨床前期研究.pdf

1、中山大學(xué)博士后學(xué)位論文外周血樹突狀細(xì)胞與T細(xì)胞亞群在肝移植中應(yīng)用價(jià)值的臨床前期研究姓名：錢世鹍申請學(xué)位級別：博士后專業(yè)：器官移植指導(dǎo)教師：余新炳何曉順20060101中山大學(xué)博士后研究工作報(bào)告群與正常人、肝硬化肝移植患者和肝癌肝切除患者進(jìn)行比較，旨在對DCs疫苗在肝癌肝移植中潛在應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行臨床前期研究?！狙芯績?nèi)容】一肝移植供、受體外周血樹突狀細(xì)胞表型差異材料與方法：人外周血標(biāo)本分別取自正常人、肝癌肝移植術(shù)后患者、肝硬化肝移植和肝癌肝切

2、除術(shù)后患者(n=5)，年齡20～60歲，外周血每份50mL，進(jìn)行外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMC)分離。用AIM—V無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)基將PBMC密度調(diào)到5109cells／L，加入25cm2培養(yǎng)瓶，37℃、5％C02培養(yǎng)2h，洗去非貼壁細(xì)胞保存?zhèn)溆茫N壁細(xì)胞為富集的DCs細(xì)胞。富集的各組DCs細(xì)胞分別用含1000U／mlrhGM—CSF和500U／m1人重組IL一4的AIM—V無

3、血清培養(yǎng)基，第3dJJl入新培養(yǎng)基及rhGMCSF和工L一4：第7d時(shí)收獲未成熟DCs，按2103／ml濃度接種24孔板，每孔體積lml，繼續(xù)用rhGM—CSF和IL一4培養(yǎng)，并加入1000U／m1人TNF—o；第8d時(shí)收獲DCs，流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞表型分析并進(jìn)行熒光顯微鏡觀察。同時(shí)收集培養(yǎng)上清，一70℃保存，用于檢測IL一12p40含量。A組：為正常人組；B組：為肝癌肝移植組；c組：肝硬化肝移植組：D組：為肝癌手術(shù)切除組。結(jié)果：在GM

4、—CSF和IL一4的存在下，單個(gè)核細(xì)胞可被誘導(dǎo)為典型的Des，肝癌肝移植組患者和其他移植組患者的DCs細(xì)胞數(shù)量為2744256107，較正常人、肝癌切除患者低，其DCs的成熟程度相應(yīng)偏低、成熟時(shí)間也相應(yīng)偏長。其CD80表達(dá)較正常人明顯增高；肝癌肝移植患者CD83表達(dá)較肝硬化肝移植增高：肝癌肝移植組CD86表達(dá)與正常人無區(qū)別，但肝硬化肝移植組的表達(dá)比正常人和肝癌肝切除組降低；HLA—DR表達(dá)在肝癌肝移植、肝硬化肝移植和肝癌肝切除組中表達(dá)均