t(821)急性髓系白血病患者FLT3基因高表達的臨床意義及機制研究.pdf

1、目的:急性髓系白血病(AML)是一類由造血細胞惡性變引起的具有高度異質(zhì)性的血液病，產(chǎn)生原因主要是骨髓中髓系細胞的分化成熟障礙、凋亡減弱以及惡性克隆性增殖。t(8;21)(q22;q22)染色體易位形成AML1/ETO融合基因是AML中最常見的遺傳學(xué)改變，已知僅存在AML1/ETO并不足以導(dǎo)致白血病，t(8;21)白血病患者常合并其他染色體或基因的異常。本研究旨在探討AML1/ETO融合基因陽性的急性髓系白血病M2(AML/M2)患者FL

2、T3基因表達量與臨床預(yù)后的相關(guān)性及其意義，并探索其致病的可能機制。
　　方法:本研究選取解放軍總醫(yī)院2008-2011年21例初治AML1/ETO陽性AML-M2患者，統(tǒng)計其發(fā)病時資料，通過RQ-PCR定量分析此類患者FLT3基因表達量，追蹤其總生存率及無進展生存率。選取AML1/ETO陽性細胞系(U937-A/E、Skno-1、Kasumi-1)和AML1/ETO陰性細胞系(U937、Skno-1-siA/E、HL-60)，通過

3、定性PCR、定量RQ-PCR、Western Blot等觀察mRNA水平及蛋白水平FLT3、STAT5等基因的差異;給予FLT3及STAT5抑制劑后，利用流式細胞儀檢測細胞的凋亡，利用CCK-8檢測細胞的增殖和藥物抑制率，并通過WesternBlot再次觀察上述蛋白表達量的變化。
　　結(jié)果:患者FLT3基因表達水平（FLT3基因/內(nèi)參基因）初診時為1.65％-261.5％。將FLT3基因表達水平大于35％者歸為高表達組（12例）,

4、表達水平低于35％者歸為低表達組（9例）。高表達組患者初診時白細胞計數(shù)＞10×109/L者為66.67％（低表達組22.22％），伴有髓外浸潤患者的比例為25％（低表達組0％），明顯高于低表達組。FLT3基因高表達組和低表達組化療后的復(fù)發(fā)率(72.72％∶22.22％)及死亡率(50％∶11.11％)的差異雖無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.0805，p=0.0614)，但有很明顯的差異趨勢，提示FLT3的表達量的高低與t(8;21)AML-M2患

5、者的預(yù)后有關(guān)。FLT3基因mRNA表達量在AML1/ETO陽性細胞系略高，但蛋白水平卻升高不明顯。STAT5a蛋白、STAT5b蛋白及p-STAT5b蛋白表達量在AML1/ETO陽性細胞系中明顯高于AML1/ETO陰性細胞系。應(yīng)用FLT3抑制劑及STAT5抑制劑后，AML1/ETO陽性細胞的凋亡明顯增加，細胞增殖明顯減弱。提示FLT3可能與AML1/ETO協(xié)同作用導(dǎo)致下游STAT5通路的異常激活。
　　結(jié)論: t(8;21)急性髓