急性早幼粒細(xì)胞白血病患者FLT3基因突變與表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、背景與目的：“兩次打擊”學(xué)說認(rèn)為，白血病的發(fā)生常常累及兩大類以上基因的突變。第一類基因突變的結(jié)果往往引起酪氨酸激酶的持續(xù)活化，從而賦予細(xì)胞增殖和生存的優(yōu)勢，這類基因主要包括FLT3、C-kit以及BCR/ABL融合基因等。第二類基因突變的結(jié)果常常導(dǎo)致細(xì)胞分化的受阻，這類基因包括C/EBP α、PML/RAR α、AML1/ETO融合基因等。顯然，受累基因的不同賦予白血病細(xì)胞不同的生物學(xué)特征，而在臨床上可能呈現(xiàn)不同的臨床表現(xiàn)和癥狀以及對治

2、療的不同反應(yīng)。目前，對急性白血病患者FLT3基因的突變以及PML/RAR α融合基因在人類急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)的作用進(jìn)行了大量深入的研究。但是，有關(guān)APL患者中FLT3基因突變，PML/RAR α融合基因mRNA表達(dá)陽性并伴有FLT3基因突變患者的臨床表現(xiàn)、癥狀、以及療效仍然缺乏全面詳細(xì)的研究。為此，本研究系統(tǒng)分析了APL患者FLT3基因突變、FLT3基因mRNA表達(dá)、PML/RAR α融合基因mRNA表達(dá)及其與患者臨床表現(xiàn)、

3、療效的關(guān)系和意義。 方法：收集自2007年4月～2008年3月就診湘雅醫(yī)院血液科的APL患者骨髓標(biāo)本，提取白細(xì)胞(WBC)基因組DNA和細(xì)胞總RNA后，分別采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、逆轉(zhuǎn)錄(RT)PCR和DNA酶切以及巢式RT-PCR技術(shù)分析FLT3基因內(nèi)部串連重復(fù)(ITD)突變，F(xiàn)LT3基因D835點(diǎn)突變，F(xiàn)LT3基因mRNA表達(dá)以及PML/RAR α融合基因mRNA表達(dá)。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步分析FLT3突變型APL患者以及

4、PML/PAR α融合基因mRNA表達(dá)陽性并伴有FLT3基因突變的APL患者的臨床表現(xiàn)、癥狀、療效及其關(guān)系。 結(jié)果：34例APL患者中，4例患者可檢測到FLT3/ITD突變，約為被檢測患者的11.8％，4例患者可檢測到FLT3 D835點(diǎn)突變，約占被檢測患者的11.8％。其中，有兩例患者既存在FLT3/ITD突變，又存在FLT3 D835點(diǎn)突變。另外，30例患者可檢測到FLT3基因mRNA表達(dá)，陽性率為88.3％，22例患者可檢

5、測到PML/PAR α融合基因mRNA表達(dá)，陽性率為64.7％，包括15例表達(dá)長型(L型)，7例表達(dá)短型(S型)PML/PAR α融合基因的患者。在4例FLT3/ITD突變的APL患者中，均表達(dá)PML/PAR α融合基因，即3例患者表達(dá)S型，1例患者表達(dá)L型，而在另4例FLT3 D835點(diǎn)突變的患者中，1例患者表達(dá)L型，2例患者表達(dá)S型，另一例患者既未檢測到L型又未能檢測到S型PML/RAR α融合基因的表達(dá)。 統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示

6、，F(xiàn)LT3/ITD突變型患者中高外周血WBC數(shù)(WBC≥10×109/L)患者的陽性率明顯多于FLT3/ITD野生型患者，其差別具有顯著意義(P<0.05)。在FLT3突變并伴有PML/RAR α融合基因表達(dá)的患者中高外周血WBC數(shù)患者的陽性率顯著多于僅表達(dá)PML/PARα融合基因患者中的陽性率，其差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但是，在FLT3/ITD突變型以及FLT3/ITD突變并伴有PML/RAR α融合基因表達(dá)的患者中，骨髓

7、原始細(xì)胞與早幼粒細(xì)胞兩者之和高含量(骨髓原始細(xì)胞與早幼粒細(xì)胞兩者之和≥80％)患者的陽性率、具有B級出血癥狀患者的陽性率、完全緩解患者的陽性率與FLT3/ITD野生型或僅表達(dá)PML/RAR α融合基因患者中的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同時(shí)，在FLT3 D835點(diǎn)突變患者中，高外周血WBC數(shù)患者的陽性率、骨髓原始細(xì)胞與早幼粒細(xì)胞兩者之和高含量患者的陽性率、具有B級出血癥狀患者的陽性率、完全緩解患者的陽性率與FLT3D835野

8、生型患者中陽性率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：在APL患者中存在較高的FLT3突變，F(xiàn)LT3/ITD和D835突變發(fā)生率基本相同，兩種突變既可單獨(dú)存在也可同時(shí)存在于APL患者；在APL患者中，大部分可檢測到FLT3 mRNA表達(dá)；大部分FLT3/ITD突變型以及FLT3突變并伴有PML/RAR α融合基因表達(dá)的APL患者常表現(xiàn)高外周血WBC數(shù)，但其骨髓原始細(xì)胞與早幼粒細(xì)胞兩者之和的含量，出血癥狀以及完全緩解率與FL