溶血磷脂酸對人卵巢癌細胞P120catenin表達的影響.pdf

1、目的:
　　 1.研究溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)誘導人漿液性卵巢癌細胞株-SKOV3細胞表達P120catenin(P120ctn)的變化。
　　 2.研究酪氨酸蛋白激酶抑制劑Genistein對LPA誘導SKOV3細胞表達P120ctn變化的逆轉作用。探討LPA和P120ctn在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤和轉移的作用機制。
　　 方法:
　　 1.取對數(shù)生長期的SKOV

2、3細胞,分別加入終濃度為0、0.1、1、10、20、40、801maol/L的LPA及0、10、20、50、100、200gmol/L的Genistein作用6、12、24h后,四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法檢測SKOV3細胞的增殖率和增殖抑制率。
　　 2.201xmol/L的LPA及200~mol/L的Genistein作用于SKOV3細胞6、12、24h后,免疫熒光化學雙重標記技術分別標記細胞膜及細胞質中的P120ctn,

3、激光共聚焦顯微鏡連續(xù)斷層掃描觀察P120ctn的表達；RT-PCR和Western blot檢測P120ctn表達的變化；流式細胞術(FCM)檢測細胞周期的變化；Millicell小室人工重組基底膜體外侵襲遷移實驗,檢測細胞侵襲和遷移能力的改變。
　　 結果:
　　 1.MTT結果顯示濃度為20μmol/L的LPA作用24h促進SKOV3細胞增殖作用最強(P<0.05)。200pmol/L的Genistein對LPA促進

4、SKOV3細胞增殖有明顯抑制作用(P<0.05)。
　　 2.免疫熒光細胞化學雙重標記激光共聚焦顯微鏡檢測和Westernblot檢測結果均顯示LPA可誘導SKOV3細胞膜中P120ctn的表達減少,胞質中的表達增多；而Genistein與LPA共同作用后,P120ctn在細胞膜和胞質中的表達則相反。RT-PCR檢測結果顯示SKOV3細胞總蛋白中P120ctn的量不變。FCM檢測顯示,與對照組相比,LPA可使SKOV3細胞處于G

5、1期的細胞減少,S期細胞增多(P<0.05)；而Genistein與LPA共同作用后,S期細胞減少,G2期細胞增多(P<0.05)。Millicell小室體外侵襲實驗檢測結果顯示LPA使細胞侵襲遷移能力明顯增強(P<0.05)；而Genistein與LPA共同作用后,細胞侵襲遷移能力減弱(P<0.05)。
　　 結論:
　　 1.LPA能促進SKOV3細胞增殖,而Genistein對LPA促進SKOV3細胞增殖有明顯抑制

6、作用。
　　 2.LPA可誘導SKOV3細胞膜中P120ctn的表達減少,胞質中的表達增多；而Genistein與LPA共同作用后,可逆轉由LPA誘導的SKOV3細胞表達P120ctn的變化。提示Genistein能抑制LPA誘導SKOV3細胞表達P120ctn的作用。
　　 3.LPA可使SKOV3細胞處于G1期的細胞減少,S期細胞增多,提示LPA可促進SKOV3細胞的增殖；而Genistein與LPA共同作用后,S期