溶血磷脂酸在卵巢癌發(fā)生機(jī)制中作用的初步探討.pdf

1、目的
　　 研究血漿溶血磷脂酸(LPA)對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖的影響，選用促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)傳導(dǎo)通路特異性阻滯劑PD98059，阻斷MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路后，觀察溶血磷脂酸對(duì)卵巢癌細(xì)胞作用的變化，從而初步探討溶血磷脂酸促卵巢癌細(xì)胞增殖的作用機(jī)制。
　　 方法
　　 體外培養(yǎng)人卵巢上皮癌細(xì)胞株SKOV3細(xì)胞，選用MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路特異性阻斷劑PD98059，將細(xì)胞隨機(jī)分為四組:正常對(duì)照組(NC組:不加

2、任何藥物)、溶血磷脂酸組（LPA組:加入不同濃度的溶血磷脂酸）、PD98059組（PD98059組:加入10μmol/L的PD98059）和溶血磷脂酸+PD98059組（LPA+PD98059組:加入不同濃度的溶血磷脂酸和10μmol/L的PD98059）。應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定溶血磷脂酸對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖活性的影響，聯(lián)合應(yīng)用PD98059阻斷MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路時(shí)，測(cè)定SKOV3細(xì)胞增殖活性的變化;應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量R

3、T-PCR測(cè)定溶血磷脂酸單獨(dú)或合用PD98059對(duì)SKOV3細(xì)胞表達(dá)環(huán)氧化酶-2(COX-2)的影響;應(yīng)用流式細(xì)胞儀(FCM)測(cè)定細(xì)胞的凋亡及細(xì)胞增殖周期動(dòng)力學(xué)的變化。
　　 結(jié)果
　　 溶血磷脂酸(濃度＞10μmol/L)以劑量依賴方式促進(jìn)SKOV3細(xì)胞增殖，PD98059顯著抑制溶血磷脂酸促增殖作用(P＜0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示，溶血磷脂酸能促進(jìn)環(huán)氧化酶-2的表達(dá)(P＜0.05)，隨著溶血磷脂酸濃度的增高，S

4、KOV3細(xì)胞環(huán)氧化酶-2基因表達(dá)增多(P＜0.05)，而合用PD98059后環(huán)氧化酶-2的表達(dá)降低(P＜0.05)。FCM結(jié)果顯示，溶血磷脂酸能促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，增加S期比率，而合用PD98059后溶血磷脂酸促增殖作用消失，且G0/G1期細(xì)胞比率升高，S期細(xì)胞比率降低。
　　 結(jié)論
　　 血漿溶血磷脂酸以濃度依賴的方式促進(jìn)卵巢癌SKOV3細(xì)胞的增殖，抑制SKOV3細(xì)胞凋亡，應(yīng)用MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路特異性阻斷劑P