弓形蟲表面抗原SAG3在蟲體入侵及增殖中的作用.pdf

1、剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）是一種呈世界性分布的專性細(xì)胞內(nèi)寄生的機(jī)會(huì)性致病原蟲，可引起人獸共患的弓形蟲病。正常人感染弓形蟲后多呈無癥狀帶蟲免疫狀態(tài)，但免疫力低下的人群（如腫瘤患者、AIDS病人、器官移植病人等）感染后，可引起嚴(yán)重的后果甚至死亡。孕婦感染弓形蟲可通過胎盤垂直傳播，引起早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎或嬰兒發(fā)育畸形等。近年來，隨著腫瘤患者、AIDS病人及寵物飼養(yǎng)愛好者的逐漸增多，弓形蟲的危害也日益突出，但至今仍無治療弓形

2、蟲病的安全有效藥物，因此深入了解其致病機(jī)制對(duì)于弓形蟲的防治具有重要意義。 弓形蟲致病的首要步驟是對(duì)宿主細(xì)胞的入侵及在宿主細(xì)胞內(nèi)的快速增殖，但迄今為止，人們對(duì)入侵和增殖的機(jī)制尚未明了。已有的研究表明弓形蟲SRS（SAG1-related sequence）蛋白超家族在其中起了重要作用，而SAG3是SRS蛋白超家族中非常重要的一員，其在速殖子、緩殖子及子孢子等多個(gè)時(shí)期均有表達(dá)，且具有較低的免疫原性。雖然已有的研究顯示SAG3參與蟲體

3、的入侵及增殖，但是目前關(guān)于SAG3的研究極少，其在弓形蟲致病中的作用和地位并不知曉，因此深入研究SAG3的功能將為研究闡明弓形蟲致病機(jī)制提供科學(xué)資料。 研究目的： 本研究利用RNAi技術(shù)，研究弓形蟲SAG3對(duì)蟲體入侵和增殖能力的影響，以期能深入了解表面抗原SAG3的功能，為闡明弓形蟲致病機(jī)制提供科學(xué)資料。 研究?jī)?nèi)容： 1、弓形蟲SAG3對(duì)蟲體入侵的作用：用電穿孔的方法將針對(duì)SAG3基因3’-UTR區(qū)的ds

4、RNA轉(zhuǎn)入弓形蟲速殖子體內(nèi)，轉(zhuǎn)染后的蟲體感染Hela細(xì)胞，分別于轉(zhuǎn)染后5min、30min、1h和2h提取細(xì)胞蟲體的總RNA，并用半定量RT-PCR方法分析與弓形蟲入侵密切關(guān)的MIC2、ROP2和GRA2三個(gè)基因的表達(dá)量的變化，同時(shí)設(shè)立無相關(guān)對(duì)照組（GFP），電轉(zhuǎn)條件對(duì)照組和正常對(duì)照組。 2、弓形蟲SAG3對(duì)蟲體增殖的作用：用電穿孔的方法將SAG3基因3’-UTR區(qū)和CDS區(qū)的dsRNA轉(zhuǎn)入弓形蟲速殖子體內(nèi)，轉(zhuǎn)染后的弓形蟲感染H

5、ela細(xì)胞，分別于轉(zhuǎn)染后12h、24h和48h提取細(xì)胞蟲體的總RNA并用半定量RT-PCR方法分析弓形蟲嘌呤補(bǔ)救合成途徑中AK、HXGPRT兩個(gè)關(guān)鍵酶基因的表達(dá)量的變化，同時(shí)設(shè)立無相關(guān)對(duì)照組（GFP），電轉(zhuǎn)條件對(duì)照組和正常對(duì)照組。 研究結(jié)果： 1)轉(zhuǎn)染SAG3基因dsRNA的弓形蟲感染Hela細(xì)胞后，MIC2、ROP2和GRA2的表達(dá)量均低于對(duì)照組。 2)轉(zhuǎn)染SAG3基因dsRNA的弓形蟲感染Hela細(xì)胞后，AK