抑制TGF-β1對(duì)慢性環(huán)孢素腎病小鼠Smad2-3及ILK信號(hào)分子的影響.pdf

1、目的:構(gòu)建小鼠環(huán)孢素腎病(CCN)模型，通過(guò)特異性抑制TGF-β1，觀察Smad2/3、ILK信號(hào)蛋白變化，評(píng)估TGF-β1/Smad/ILK信號(hào)通路在CCN小管間質(zhì)纖維化中的作用。
　　 方法:BALB/c小鼠50只隨機(jī)分成5組（10只/組）:環(huán)孢素模型組(CMG)、干預(yù)模型組(IMG)、溶媒對(duì)照組(SCG)、低鹽對(duì)照組(LCG)和正常對(duì)照組(NCG)。CMG與IMG組采用低鹽飼養(yǎng)并環(huán)孢素60 mg/(kg.d)灌胃，從第28

2、天腹腔給予TGF-β1特異抑制劑SB-43154210mg/(kg.2d)。38天后處死小鼠，取血清測(cè)定血肌酐(SCr);取腎臟組織常規(guī)染色觀察病理變化，堿水解法檢測(cè)Hyp水平，免疫組化觀察TGF-β1、磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)、ILK著染情況，RT-PCR檢測(cè)TGF-β1、Smad2/3及ILK mRNA表達(dá)，Western Blot檢測(cè)ILK蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:①兩個(gè)環(huán)孢素模型組(CMG和IMG)小鼠體

3、重顯著下降(P＜0.01)、SCr顯著升高(P＜0.01)，CMG組小鼠較IMG尤其明顯(P＜0.05）。②腎臟病理顯示三個(gè)對(duì)照組(NCG、LCG和SCG)小鼠腎臟結(jié)構(gòu)無(wú)明顯異常，但兩個(gè)環(huán)孢素模型組小鼠腎小管結(jié)構(gòu)不同程度損傷，間質(zhì)炎性細(xì)胞增多，藍(lán)色膠原染色不同程度增多，CMG組小鼠腎臟病變尤其明顯。③三個(gè)對(duì)照組腎臟Hyp水平無(wú)明顯差異，但兩個(gè)環(huán)孢素模型組腎組織Hyp水平明顯增多(P＜0.01)，IMG組Hyp低于CMG組(P＜0.01)

4、。④三個(gè)對(duì)照組腎組織未見(jiàn)或極少TGF-β1、P-Smad2/3及ILK免疫著染，而兩個(gè)模型組腎組織TGF-β1、P-Smad2/3及ILK免疫著染明顯增強(qiáng)(P＜0.01)，突出表達(dá)于小管間質(zhì)，IMG組上述因子免疫著染程度低于CMG組(P＜0.01)。⑤三個(gè)對(duì)照組腎組織TGF-β1、Smad2/3及ILK mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯差異，而兩個(gè)環(huán)孢素模型組腎組織TGF-β1、Smad2/3及ILK mRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01)，IMG

5、組TGF-β1及Smad2/3表達(dá)上調(diào)低于CMG組(P＜0.01)，ILK表達(dá)上調(diào)低于CMG組(P＜0.05）。⑥Western Blot顯示三個(gè)對(duì)照組腎組織ILK蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異，兩個(gè)環(huán)孢素模型組腎組織ILK表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01)，但I(xiàn)MG組ILK表達(dá)上調(diào)低于CMG組(P＜0.01)。⑦腎組織Hyp、TGF-β1、P-Smad2/3、ILK表達(dá)水平，以及SCr水平彼此呈正相關(guān)(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:1.TGF-