槲皮素對環(huán)孢素誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化及其TGF-β1-Smads信號分子蛋白的影響.pdf

1、目的:觀察槲皮素在環(huán)孢素(CsA)誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(EMT)中的作用,探討槲皮素對腎小管EMT相關(guān)TGF-β1/Smads信號分子蛋白的影響。
　　方法:
　　1.將體外培養(yǎng)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞株(NRK-52E)分為正常對照組及不同藥物(CsA、TGF-β1阻斷劑、槲皮素)處理組,CCK8檢測法觀察細(xì)胞的增殖抑制情況。 2.將NRK-52E細(xì)胞培養(yǎng)分為6組:正常對照組(A組,含胎牛血清的培養(yǎng)液)、環(huán)孢素處理組

2、(B組,加入含CsA培養(yǎng)液)、槲皮素對照組(C組,加入含槲皮素培養(yǎng)液)、阻斷劑組(D組,培養(yǎng)液中先加入TGF-β1阻斷劑,24h后再加入CsA)、槲皮素干預(yù)1組(E組,培養(yǎng)液先加入CsA,24h后再加入槲皮素)、槲皮素干預(yù)2組(F組,培養(yǎng)液先加入含CsA,24h后再加入TGF-β1阻斷劑和槲皮素),各組細(xì)胞培養(yǎng)24h后,采用RT-PCR法、免疫組化法或Western-blot法檢測各組細(xì)胞成纖維特異蛋白(FSP-1)、α-平滑肌肌動蛋白

3、(α-SMA)、TGF-β1、Smad2和Smad7 mRNA和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.CsA處理細(xì)胞后其活力明顯降低,不同濃度的阻斷劑或槲皮素后處理24h后其細(xì)胞存活率均增高(P<0.05),最適濃度分別10 umol/L、40μmol/L,且槲皮素處理組存活率較阻斷劑組高(P<0.05)。
　　2.FSP-1:免疫著染顯示主要表達(dá)于胞漿;C組mRNA和蛋白表達(dá)與A組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);B、E、F組

4、mRNA和蛋白表達(dá)均出現(xiàn)不同程度上調(diào)(P<0.05),其中B組上調(diào)尤明顯;D組mRNA和蛋白表達(dá)明顯低于B、E、F組,但高于A、C組(P<0.05);F組mRNA及蛋白表達(dá)高于E組(P<0.05)。
　　3.α-SMA:免疫著染顯示主要表達(dá)于胞漿;C組mRNA和蛋白表達(dá)與A組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);B、E、F組mRNA和蛋白表達(dá)均出現(xiàn)不同程度上調(diào)(P<0.05),其中B組顯著上調(diào);D組mRNA和蛋白表達(dá)明顯低于B、E、F組,

5、但高于A、C組(P<0.05);F組mRNA與E組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),但蛋白表達(dá)高于E組(P<0.05)。
　　4.TGF-β1:免疫著染顯示主要表達(dá)于胞漿;C組mRNA和蛋白表達(dá)與A組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);B、E、F組mRNA和蛋白表達(dá)均不同程度上調(diào)(P<0.05),其中B組上調(diào)尤明顯;D組mRNA與蛋白表達(dá)均明顯低于B、E、F組(P<0.05),與C組無明顯差異(P>0.05);F組mRNA高于E組(P<0.

6、05),但蛋白表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　5.Smad2:免疫著染顯示主要表達(dá)于胞漿;C組mRNA和蛋白表達(dá)與A組無統(tǒng)計學(xué)差異;B、E、F三組mRNA和蛋白水平均有不同程度表達(dá)上調(diào)(P<0.05),其中B組上調(diào)尤明顯;D組mRNA與蛋白表達(dá)均明顯低于B、E、F組(P<0.05),與C組無明顯差異(P>0.05);F組mRNA表達(dá)高于E組(P<0.05),蛋白表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　6.Smad7:

7、免疫著染顯示主要表達(dá)于胞漿;C組mRNA和蛋白表達(dá)與A組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);B、D組mRNA和蛋白水平均有不同程度表達(dá)下調(diào)(P<0.05),其中B組下調(diào)尤顯著;D組mRNA和蛋白水平較A、C組表達(dá)下調(diào)(P<0.05);E、F組蛋白水平明顯高于A、B、C、D組,mRNA水平高于B組卻低于C、D組(P<0.05);E組mRNA和蛋白水平表達(dá)高于F組(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.槲皮素可有效抑制環(huán)孢素A誘導(dǎo)大鼠