綿羊妊娠早期骨髓表達ISG15和PIBF的研究.pdf

1、免疫器官由中樞免疫器官和周圍免疫器官兩部分組成，其中中樞免疫器官包括骨髓和胸腺。骨髓是 T淋巴細胞的出生地，骨髓的重要功能就是生成各種細胞的干細胞，這些干細胞通過分化再生成各種血細胞如紅細胞、白細胞、血小板等，因此，骨髓不但是造血器官，對于維持機體的生命和免疫力也非常重要。為探索綿羊妊娠早期對中樞免疫器官骨髓的影響，本試驗以繁殖機能正常的綿羊為試驗動物，研究妊娠早期綿羊骨髓表達ISG15和PIBF因子的的變化規(guī)律。首先對綿羊埋植孕激素海

2、綿栓，進行同期發(fā)情處理，進而試情并配種（對照組不配種）。然后采集發(fā)情后第16天未配種的，以及配種后第13、16和25天妊娠的綿羊骨髓（通過屠宰解剖，確定配種后第13、16和25天妊娠的綿羊，即看到孕體的存在）。將不同妊娠天數(shù)的骨髓分別置于2mL冷凍管中保存在-196℃液氮中，帶回實驗室檢測mRNA的表達和蛋白印跡分析。另外采集不同妊娠天數(shù)的綿羊骨髓，用PBS液沖洗后將骨髓塊放入4％多聚甲醛的PBS溶液中固定，用于免疫組織化學檢測。得到了

3、如下結果：
　　1、利用實時熒光定量PCR法檢測和蛋白印跡分析發(fā)現(xiàn)，妊娠早期綿羊骨髓中的ISG15 mRNA和蛋白的表達量從未妊娠到妊娠期逐漸升高，ISG15 mRNA和蛋白在妊娠16天羊骨髓中的表達量高于未妊娠16天，妊娠13天和妊娠25天。而且在妊娠16天表達量達最高。然后，到妊娠25天表達量則會逐漸降低。通過免疫組織化學檢測確認，ISG15蛋白在妊娠16天羊骨髓中的染色強度高于未妊娠16天，妊娠13天和妊娠25天，而且主要在

4、骨髓間質的細胞質表達?？傊?，綿羊妊娠早期ISG15 mRNA和蛋白表達量的增加與孕體來源的干擾素tau有關。
　　2、mRNA和蛋白水平進行了PIBF因子表達的檢測，證明在妊娠16天羊骨髓中mRNA的表達量高于未妊娠16天，妊娠13天和妊娠25天。而且在妊娠16天表達量達最高。然而，到妊娠25天mRNA表達量則會逐漸降低，蛋白水平的表達與mRNA水平的表達基本一致，在妊娠13天、妊娠16天和妊娠25天羊骨髓中的表達，在未妊娠16天

5、的骨髓中不表達。妊娠16天和25天骨髓PIBF蛋白的表達量顯著高于妊娠13天，妊娠16天和妊娠25天的骨髓中PIBF蛋白的表達明顯，基本沒有差異。
　　總之，在綿羊妊娠早期，孕體來源的干擾素tau通過血液循環(huán)，作用于骨髓，使骨髓間質的細胞上調(diào)表達ISG15 mRNA和蛋白；同時結果表明，妊娠早期PIBF也上調(diào)表達，可能是干擾素tau通過血液循環(huán)抑制黃體的退化，使黃體持續(xù)產(chǎn)生孕酮，從而誘導PIBF蛋白上調(diào)表達，調(diào)節(jié)骨髓的免疫功能，使