轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中舌癌永生化細(xì)胞系建立與癌干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物的檢測(cè).pdf

1、獨(dú)創(chuàng)性聲明秉承學(xué)校嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)風(fēng)與優(yōu)良的科學(xué)道德，本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，不包含本人或他人己申請(qǐng)學(xué)位或其他用途使用過(guò)的成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了致謝。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切責(zé)任。論文作者簽名：專} 期≥毒砂 拋義作有登稻：勺F

2、卅，1 V日期：砌{ ；．6 ．熠卸：嘴p 妒保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)說(shuō)明’本人完全了解廣西醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學(xué)位期間，博士后工作人員、人才小高地工作人員在校工作期間，論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬?gòu)V西醫(yī)科大學(xué)。本人保證在校期間和離校后，發(fā)表或使用論文工作成果時(shí)署名第一作者單位均為廣西醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留論文，允許論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。論文作者簽名：

3、卸幻≥苛U日期：加鑼．易．搿鐘‘嚶抄轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中舌癌永生化細(xì)胞系建立與癌干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物的檢測(cè)摘要目的：在建立舌癌T c a 8 1 1 3 淋巴道轉(zhuǎn)移裸鼠模型的基礎(chǔ)上，建立永生化的舌癌細(xì)胞系，證實(shí)舌癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中存在癌干細(xì)胞的可能，并進(jìn)一步檢測(cè)舌癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中癌干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物的表達(dá)情況。方法：采用癌細(xì)胞足墊注射法建立淋巴道轉(zhuǎn)移模型，4 周后取淋巴結(jié)進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)，從中分離、純化舌癌細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)傳代培養(yǎng)，并進(jìn)行永生化細(xì)胞系的生物

4、學(xué)特性鑒定：①倒置相差顯微鏡下觀察活細(xì)胞形態(tài)、光鏡下觀察H E 染色細(xì)胞形態(tài)、透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)；②細(xì)胞核型分析染色體形態(tài)；③生長(zhǎng)曲線與倍增時(shí)間測(cè)定分析增殖特性；④致瘤性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)成瘤能力；⑤連續(xù)傳代1 0 0 代以上。繼而采用永生化舌癌細(xì)胞系建立舌癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型，4 周后收集淋巴結(jié)，免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)癌干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物C D 4 4 、B C R P 、E S A 蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：在淋巴道轉(zhuǎn)移模型中，H E 染色與E M

5、 A 免疫組化染色發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)有散在或灶性鱗狀上皮癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。進(jìn)而取轉(zhuǎn)移模型裸鼠的淋巴結(jié)組織進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)，經(jīng)分離和純化以及連續(xù)傳代而建立舌癌永生化細(xì)胞系，命名為T c a 8 1 1 3 一M 1 ，目前傳代1 0 0 余代，時(shí)間近2 年，生長(zhǎng)穩(wěn)定，倍增時(shí)問(wèn)為2 2 ．5 1 h ，染色體眾數(shù)5 8 ，保持人染色體形態(tài)，細(xì)胞形態(tài)與T c a 8 1 1 3 細(xì)胞相似。T c a 8 1 1 3 叫1 在裸鼠體內(nèi)的成瘤率為l O o ％