親屬間HLA單倍體與全相合非體外去T細(xì)胞外周血干細(xì)胞移植臨床及免疫功能重建研究.pdf

1、目的：⑴研究應(yīng)用清髓性預(yù)處理和個(gè)體化的按HLA位點(diǎn)不同的差異程度聯(lián)合多少不等的免疫抑制劑進(jìn)行親屬間HLA單倍體相合非體外去T細(xì)胞外周血干細(xì)胞移植（PBSCT）治療惡性血液病，通過(guò)臨床和實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證適合臨床應(yīng)用的能減少排斥和重度急性移植物抗宿主病（aGVHD）的新移植方案，并對(duì)單倍體移植后免疫功能重建進(jìn)行研究；⑵前瞻性對(duì)比研究同期親屬間HLA單倍體與HLA全相合非體外去T細(xì)胞PBSCT治療惡性血液病的移植效果，探討HLA單倍體移植是否可以取

2、得與HLA全相合非體外去T細(xì)胞PBSCT治療惡性血液病相似的植入、移植物抗宿主?。℅VHD）發(fā)生率、腫瘤復(fù)發(fā)率及長(zhǎng)期無(wú)白血病生存率（LFS）；⑶前瞻性的對(duì)比研究同期HLA單倍體與HLA全相合非體外去T細(xì)胞PBSCT后兩組患者T、B、NK細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化，探討PBSCT后免疫功能重建的特點(diǎn)，并對(duì)發(fā)生主要并發(fā)癥與未發(fā)生患者的免疫功能重建進(jìn)行對(duì)比研究。
　　 方法：⑴HLA單倍體相合PBSCT治療惡性血液病52例，患者中位數(shù)年齡38

3、（11～47）歲，男32例，女20例，HLA1個(gè)位點(diǎn)不合9例，2～3個(gè)位點(diǎn)不合43例。惡性血液病按移植時(shí)病情分為標(biāo)危型36例，高危型16例。HLA-A、B及DR位點(diǎn)分型均采用微量順序特異引物聚合酶鏈反應(yīng)（微量PCR-SSP）方法進(jìn)行。預(yù)處理方案為清髓性的，主要采用阿糖胞苷（Ara-C）+馬利蘭（Bu）+環(huán)磷酰胺（Cy）方案，預(yù)防GVHD均以環(huán)孢素（CsA）加短程甲氨蝶呤（MTX）為基礎(chǔ)方案，HLA1個(gè)位點(diǎn)不合時(shí)加用霉酚酸酯（MMF），H

4、LA2～3個(gè)位點(diǎn)不合時(shí)在加用MMF基礎(chǔ)上再聯(lián)合抗胸腺細(xì)胞球蛋白（ATG）及抗CD25單克隆抗體，CsA于-1d開(kāi)始使用，劑量為2.5mg·kg-1·d-1，能口服時(shí)改為5mg·kg-1·d-1，于+180d后逐漸減量，減到原劑量的2/3，到11個(gè)月后逐漸減量直到停用，MTX靜脈滴注劑量為+1d15mg/m2，+3、+6、+11d劑量為10mg/m2，MMF用量為1g·d-1分2次口服，于-1d開(kāi)始，如無(wú)aGVHD，于+40d減半量，+9

5、0～+100d停用；兔抗人ATG2.5mg·kg-1·d-1×4d（-4～-1d）；抗CD25單克隆抗體20mg于0天輸注干細(xì)胞前及+4d各靜點(diǎn)1次。使用粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）對(duì)供者進(jìn)行PBSC動(dòng)員，劑量為7～10μg·kg-1·d -1，于動(dòng)員后第5及第6天用血液細(xì)胞分離機(jī)（COBE Spectra）進(jìn)行PBSC單采，采集前檢測(cè)供者血常規(guī)（包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血涂片瑞氏染色后白細(xì)胞分類(lèi)），采集后檢測(cè)PBSC單個(gè)核細(xì)胞數(shù)及CD34

6、+細(xì)胞數(shù)并將PBSC經(jīng)中心靜脈回輸給患者；⑵同期111例惡性血液病患者異基因PBSCT（allo-PBSCT），其中單倍體相合移植患者51例，同期全相合移植患者60例。預(yù)處理方案均為清髓性，主要采用改良Bu/Cy方案和Bu/Cy方案。單倍體與全相合移植患者均以經(jīng)典CsA加短程MTX作為基礎(chǔ)方案預(yù)防GVHD，單倍體移植患者另根據(jù)HLA位點(diǎn)不合的程度加用MMF和（或）ATG及抗CD25單克隆抗體?；颊咴陬A(yù)處理前行鞘內(nèi)注射MTX10～15mg

7、或口服甲基環(huán)已亞硝脲（Me-CCNU）預(yù)防腦膜白血病的發(fā)生。兩組患者發(fā)生aGVHD后均加用甲潑尼龍（MP）治療，發(fā)生慢性移植物抗宿主?。╟GVHD）后一般給予潑尼松加硫唑嘌呤治療。移植物為經(jīng)G-CSF動(dòng)員的未進(jìn)行體外去除T細(xì)胞的PBSC；⑶采用間接免疫熒光法，主要試劑為CD3、CD4、CD8、CD19、CD16、CD56一抗及二抗，首先制備單個(gè)核細(xì)胞懸液，再進(jìn)行T、B、NK亞群檢測(cè)。對(duì)移植前，移植后1月、3月、6月、12月及18月兩組患

8、者的T（CD3+、CD4+、CD8+）、B（CD19+）、NK（CD16+、CD56+）細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化，并進(jìn)行組間比較。同時(shí)檢測(cè)100名健康人的T、B、NK亞群作為對(duì)照組，與單倍體組和全相合組移植前后各時(shí)間點(diǎn)免疫功能變化進(jìn)行比較。
　　 結(jié)論：⑴清髓性預(yù)處理方案和依HLA不合位點(diǎn)差異的程度聯(lián)合多少不等含或不含ATG和抗CD25單克隆抗體免疫抑制劑的預(yù)防GVHD方案，移植物為經(jīng)G-CSF動(dòng)員的非體外去T細(xì)胞的PBSC的HLA單

9、倍體移植方案治療惡性血液病安全可行；⑵單倍體非體外去T細(xì)胞外周血干細(xì)胞移植造血功能重建快，供者易于接受，可多次采集，而重度aGVHD及廣泛型cGVHD發(fā)生率并不高；⑶HLA單倍體與HLA全相合非體外去T細(xì)胞的PBSCT治療惡性血液病時(shí)的植入、cGVHD發(fā)生率、復(fù)發(fā)率及長(zhǎng)期LFS相似。單倍體移植時(shí)aGVHD高于全相合移植，但重度aGVHD發(fā)生率兩組相似；⑷單倍體與全相合非體外去T細(xì)胞外周血干細(xì)胞移植造血功能重建快，而重度aGVHD及廣泛型