酒石酸溴莫尼定治療內(nèi)皮素-1誘導(dǎo)的兔慢性視神經(jīng)損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：青光眼是全球第二位的致盲性眼病。如何阻止視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（retinal ganglion cells，RGCs）的凋亡，保護(hù)視功能是當(dāng)前青光眼治療的首要任務(wù)。除了眼壓升高的機(jī)械壓迫機(jī)制，視神經(jīng)乳頭缺血是青光眼視神經(jīng)病變的病理機(jī)制之一，最具有代表性的是正常眼壓性青光眼（normal tension glaucoma，NTG）的視神經(jīng)損害。本研究針對(duì)血管學(xué)說(shuō)應(yīng)用血管收縮因子內(nèi)皮素-1（endothelin-1，ET-1）建立兔慢性視

2、神經(jīng)損害模型，并探討新型α2-受體激動(dòng)劑——0.2％酒石酸溴莫尼定（0.2％brimonidine tartrate，BMD；Alphagan）對(duì)這種模型是否具有視神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 方法：
　　 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：本實(shí)驗(yàn)共分四組，首先將28只成年健康純種新西蘭大白兔（雌雄兼用）隨機(jī)分為A，B兩組，兩組內(nèi)右眼定為模型眼A1組和B1組，分別與之對(duì)應(yīng)的左眼定為對(duì)照眼A2組和B2組，每組14只眼。
　　 2實(shí)驗(yàn)方法：

3、動(dòng)物表麻下（0.5％鹽酸丙美卡因滴眼液），應(yīng)用30-G微量注射器玻璃體腔注藥，A1組和B1組注入ET-1（10-6M，20μl），A2組和B2組注入0.9％氯化鈉注射液20μl，每周注射2次，連續(xù)4周。B1組和B2組給予0.2％酒石酸溴莫尼定滴眼液點(diǎn)眼，1滴/12小時(shí)直至取標(biāo)本。
　　 3眼壓測(cè)量：注藥前1天、注藥后7天、14天、28天及42天各組均測(cè)量眼壓并記錄。
　　 4閃光視覺(jué)誘發(fā)電位（F-VEP）檢測(cè)：注藥前1天

4、、注藥后14天、28天及42天通過(guò)F-VEP評(píng)定視神經(jīng)的損傷情況。觀察指標(biāo)為F-VEP的P1波潛伏期LP1（ms）。
　　 5病理組織學(xué)觀察：于28天全麻下隨機(jī)摘取各組各7只眼球，余下者42天全麻下摘取，固定，視網(wǎng)膜組織制成石蠟切片做HE染色，光鏡下觀察視網(wǎng)膜組織的病理變化；做TUNEL染色，光鏡下觀察計(jì)數(shù)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層5個(gè)高倍視野TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量且作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 6電鏡觀察：分別于28天、42天在摘取的

5、各組眼球中每組分別隨機(jī)選取2只眼緊貼眼球切取球后1mm處視神經(jīng)固定，制成環(huán)氧樹(shù)脂超薄切片，經(jīng)鉛鈾染色，透射電鏡下觀察視神經(jīng)軸突的超微結(jié)構(gòu)改變。
　　 結(jié)果：
　　 1眼壓：各組初始眼壓無(wú)顯著性差異（P>0.05）。B1組、B2組眼壓在注藥后7天開(kāi)始降低，42天時(shí)降至最低水平，均值分別為（15.93±1.10mmHg，15.54±1.01mmHg）。雙因素方差分析A1組與B1組眼壓差異性顯著（P<0.01），具體結(jié)果為從注

6、藥14天開(kāi)始差異性顯著，持續(xù)至42天。A1組與A2組的眼壓及B1組與B2組的眼壓各時(shí)間點(diǎn)均無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　 2 F-VEP P1波潛伏期LP1變化情況：各組初始LP1無(wú)顯著性差異（P>0.05）。A1組LP1于注藥后14天開(kāi)始逐漸延長(zhǎng)，并持續(xù)至42天，最大值出現(xiàn)在28天，均值為47.86±3.07ms。然而B(niǎo)1組LP1相對(duì)穩(wěn)定，A2組、B2組LP1在各時(shí)間點(diǎn)無(wú)明顯改變。雙因素方差分析A1組與A2組的LP1及A1

7、組與B1組LP1差異顯著（P<0.01），具體結(jié)果為分別從注藥14天開(kāi)始差異性顯著，并持續(xù)至42天。而B(niǎo)1組與A2組LP1及B1組與B2組LP1無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　 3組織學(xué)觀察
　　 3.1 HE染色：A2組和B2組在注藥后28、42天兔眼視網(wǎng)膜各層組織清晰可見(jiàn)，細(xì)胞排列整齊均勻，層次分明，無(wú)組織壞死及細(xì)胞變性。A。組視網(wǎng)膜較對(duì)照組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目明顯減少，細(xì)胞出現(xiàn)變性。在各時(shí)間點(diǎn)A1組較B1組視網(wǎng)膜

8、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)明顯減少。
　　 3.2 FUNEL染色：A2組和B2組在注藥后28、42天未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核成棕黃色的陽(yáng)性細(xì)胞。注藥28天時(shí)RGC層各組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)有顯著性差異（P<0.05），其中A1組與其他三組有差異，B1與其他三組有差異，A2組與B2組無(wú)明顯差異。注藥42天時(shí)A1組與A2組、B1組、B2組均有差異，后三組之間無(wú)明顯差異。
　　 4透射電鏡觀察：注藥后28天、42天A2組和B2組視神經(jīng)髓鞘完整，軸漿均勻，軸漿內(nèi)

9、可見(jiàn)清晰的微絲、微管和線粒體等細(xì)胞器。注藥28天A1組可見(jiàn)視神經(jīng)軸突髓鞘結(jié)構(gòu)紊亂，軸索變性，細(xì)胞器減少，可見(jiàn)線粒體空泡化，雙層膜結(jié)構(gòu)和嵴均消失，軸突之間可見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞。B1組視神經(jīng)軸突髓鞘排列較整齊，可見(jiàn)微絲、微管等細(xì)胞器結(jié)構(gòu)。注藥42天A1組可見(jiàn)視神經(jīng)軸突髓鞘結(jié)構(gòu)紊亂，軸索變性，細(xì)胞器更少見(jiàn)。B1組較28天時(shí)無(wú)明顯變化。
　　 結(jié)論：
　　 1通過(guò)玻璃體腔注射ET-1可以誘導(dǎo)兔視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡和視神經(jīng)功能損傷的模型