山羊IL-17單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、IL-17是由IL-17+T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，它不僅在人類過敏反應(yīng)、自身免疫疾病、腫瘤發(fā)生發(fā)展中起到一定的炎性作用，在機(jī)體抵抗細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲感染中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。有關(guān)IL-17在山羊機(jī)體抗感染免疫、山羊炎癥反應(yīng)中的作用還很不清楚，主要與缺乏山羊IL-17單克隆抗體有關(guān)。本研究用純化的山羊rIL-17免疫BABL/c小鼠，采集小鼠血清，建立山羊IL-17抗體的間接ELISA檢測方法;取小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞

2、融合，篩選能穩(wěn)定分泌特異性IL-17單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。研究取得如下結(jié)果:
　　1.IL-17包被濃度為8μg/mL，小鼠免疫血清孵育60 min，酶標(biāo)二抗的稀釋比例為1∶5000，作用60 min的條件下，ELISA檢測結(jié)果最佳;
　　2.獲得2株能穩(wěn)定分泌特異性rIL-17抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為B6、H8;
　　3.B6、H8細(xì)胞株的染色體數(shù)目分別為為104條、84條;
　　4.B6和H8分泌的單克隆

3、抗體亞型為IgG1，抗體輕鏈為κ型;
　　5.B6、H8細(xì)胞培養(yǎng)上清效價(jià)分別為1∶28、1∶29，小鼠腹水效價(jià)為1∶105、1∶106，純化單克隆抗體效價(jià)均為1∶105。
　　6.B6細(xì)胞株能特異性識別rIL-17和IL-17+293T細(xì)胞培養(yǎng)上清，不與pET32a標(biāo)簽融合蛋白反應(yīng)，H8細(xì)胞株只特異性識別rIL-17。Western blot結(jié)果顯示，B6與重組rIL-17、IL-17+293T細(xì)胞培養(yǎng)上清有特異性免疫結(jié)合。