肝豆?fàn)詈俗冃约膊〉幕蚍治黾盎蛟\斷的研究.pdf

1、本研究分為二部分：第一部分：ATP7B和COMMD1基因與肝豆?fàn)詈俗冃约膊∨R床表型相關(guān)性的研究。
　　 目的:檢測(cè)37例中國(guó)肝豆?fàn)詈俗冃曰颊叩腁TP7B基因和COMMD1基因，探討2個(gè)基因在WD致病和患者臨床表現(xiàn)多樣性中所起的作用。
　　 方法: PCR法選擇性擴(kuò)增ATP7B基因的突變熱區(qū)；擴(kuò)增COMMD1基因的3個(gè)外顯子包括和內(nèi)含子的交界區(qū)，并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序。再將基因型結(jié)果與臨床表型進(jìn)行相關(guān)分析。
　　 結(jié)果:

2、 37例標(biāo)本中檢測(cè)到12例有ATP7BArg778Leu突變，其中有9例表現(xiàn)為肝臟癥狀首發(fā)（75%）；2例有Thr935Met突變；COMMD1基因上沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何能引起密碼子和剪切位點(diǎn)改變的突變，檢測(cè)到了1個(gè)多態(tài)性IVS2+63C>G。
　　 結(jié)論: ATP7B仍是目前唯一確定的WD致病基因，其Arg778Leu突變與肝臟癥狀表現(xiàn)為首發(fā)癥狀有關(guān)。沒(méi)有證據(jù)支持COMMD1基因與中國(guó)人群的肝豆?fàn)詈俗冃杂嘘P(guān)。
　　 第二部分：

3、四引物擴(kuò)增受阻突變體系快速檢測(cè)Wilson病基因Arg778Leu突變。
　　 目的:建立一種不需要限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性或直接測(cè)序的新方法檢測(cè)肝豆?fàn)詈俗冃裕╓D）病人突變熱點(diǎn)ATP7B基因的Arg778Leu突變基因型。
　　 方法: 用四引物擴(kuò)增受阻突變體系聚合酶鏈反應(yīng)（Tetra-primer amplification refractory mutation system-PCR，tetra-primer ARMS

4、-PCR）檢測(cè)中國(guó)37例WD患者和30例正常對(duì)照的ATP7B基因Arg778Leu突變，并用測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 結(jié)果: 37例WD患者中檢出Arg778Leu純合突變3例，雜合突變9例，總檢出率32.43%(12/37)；30例正常對(duì)照未發(fā)現(xiàn)突變；DNA測(cè)序結(jié)果與四引物ARMS-PCR結(jié)果完全一致。
　　 結(jié)論: ATP7B基因Arg778Leu突變是中國(guó)人WD突變熱點(diǎn)；四引物ARMS-PCR法適用于Arg778Leu