雄激素受體剪切變異體7在前列腺癌去勢抵抗中的實驗研究.pdf

1、目的：
　　1、建立耐Enzalutamide前列腺癌ENZ-R-LNCaP細胞模型，并驗證雄激素受體剪切變異體7（AR-V7）在ENZ-R-LNCaP細胞的表達。
　　2、免疫組化驗證AR-V7在低、中、高危前列腺癌標本中的表達情況。
　　方法：
　　1、于含活性炭/葡聚糖處理過的胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)前列腺癌LNCaP細胞，其中加入0.1、0.3、1.0uM三個不同濃度二代雄激素受體拮抗劑Enzalutamide

2、（MDV3100），進行連續(xù)傳代培養(yǎng)，建立耐Enzalutamide的ENZ-R-LNCaP細胞模型，倒置顯微鏡下觀察LNCaP細胞在無雄激素下的生長狀態(tài)以及其形態(tài)的變化，并運用westernblot技術(shù)檢測前列腺癌LNCaP細胞AR-FL及AR-V7蛋白表達變化。
　　2、根據(jù)2015年歐洲泌尿外科學會(EuropeanAssociationOfUrology，EUA)標準，收集南昌大學第一附屬醫(yī)院泌尿外科前列腺癌術(shù)后臨床組織標

3、本40例，其中低危10例，中、高危組各15例，運用免疫組化染色方法，分別檢測在不同危險度前列腺癌標本AR-V7蛋白的表達。
　　結(jié)果：
　　1、LNCaP細胞在活性炭/葡聚糖處理過的胎牛血清培養(yǎng)液+Enzalutamide中，初期（3代）生長受到明顯抑制，表現(xiàn)為細胞難以貼壁，出現(xiàn)大量細胞死亡，僅少數(shù)存活，開始向周圍伸出突起；約傳至9代后可見細胞逐漸向周圍伸出較多突起，并相互聯(lián)系成網(wǎng)狀，細胞呈自分泌狀態(tài)；當繼續(xù)培養(yǎng)到12代時，

4、細胞不再呈自分泌狀態(tài)，隨著細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)4個月后LNCaP細胞呈鋪開樣生長，且細胞狀態(tài)及形態(tài)發(fā)生了變化，細胞體積變小，呈圓形或梭形，細胞突觸較少。
　　2、westernblot檢測AR-FL和AR-V7：加0.1,0.3,1.0uMEnzalutamide（MDV3100）的三個實驗組與未加Enzalutamide組比較，AR-V7蛋白表達呈顯著上調(diào)（P＜0.05），且在不同劑量下表達差異明顯（P＜0.05）。
　　3、

5、免疫組化顯示：結(jié)果示AR-V7絕大多數(shù)表達于細胞核內(nèi)，僅少量表達于胞質(zhì)中；40例前列腺癌標本AR-V7有19例陽性表達，總陽性表達率47.5％（19/40），其中低危陽性表達為20%（2/10）、中危陽性表達40%（6/15）及高危陽性表達73.3%(11/15)，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、在含活性炭/葡聚糖處理的胎牛血清培養(yǎng)液中加入雄激素受體阻斷劑Enzalutamide，對前列腺癌細胞LNC