hTERC基因在纖支鏡刷檢和宮頸液基細(xì)胞標(biāo)本中的臨床診斷價值.pdf

1、目的：
　　 纖支鏡刷檢因簡便、快捷、經(jīng)濟(jì)、實用且準(zhǔn)確性高而成為診斷肺癌的重要方法之一。然而，當(dāng)癌細(xì)胞異型性不明顯或數(shù)量較少時，臨床上經(jīng)常出現(xiàn)高度可疑為肺癌，反復(fù)的細(xì)胞學(xué)檢查卻是陰性的結(jié)果。這可能是由于玻片中的癌細(xì)胞被大量的紅細(xì)胞、壞死碎屑和大量粘液所掩蓋。液基細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng)（Liquid-based Cytological Test，LCT）通過祛除標(biāo)本內(nèi)的粘液、雜質(zhì)及炎性細(xì)胞，制成視野清晰的薄層涂片，在宮頸細(xì)胞學(xué)診斷上已得到

2、了細(xì)胞學(xué)工作者的一致認(rèn)可。
　　 目前宮頸癌的篩查方法多采用宮頸脫落細(xì)胞學(xué)檢查和HPV病毒檢測。盡管細(xì)胞學(xué)檢查大大降低了宮頸癌的發(fā)病率和死亡率，但由于細(xì)胞量有限降低了其敏感性，需要頻繁的隨訪調(diào)查；HPV檢測敏感性很高，但大部分HPV陽性病人會自動轉(zhuǎn)陰，僅少部分HPV陽性病變最終會發(fā)展到宮頸癌，限制了其在臨床使用的有效性。因此，建立科學(xué)、有效的診斷方法是提高肺癌和宮頸癌診斷陽性率的有效途徑，也是提高宮頸癌和肺癌患者生存率與治愈率的

3、關(guān)鍵。
　　 本課題以肺癌和宮頸癌為主攻對象，以宮頸和纖支鏡刷檢液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本為檢測基礎(chǔ)，采用FISH方法測定癌前病變及癌細(xì)胞中hTERC基因的表達(dá)；探討hTERC基因的表達(dá)與細(xì)胞學(xué)及組織學(xué)診斷結(jié)果之間的關(guān)系，對診斷肺癌和宮頸癌的臨床應(yīng)用價值。
　　 方法：
　　 收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2008年1月至2008年10月門診及住院肺癌患者術(shù)前纖維支氣管鏡刷檢標(biāo)本204例。鱗癌104例，腺癌44例，小細(xì)胞癌56

4、例，以及肺良性疾病患者40例（包括炎癥20例和結(jié)核20例）。其中隨機(jī)選取102例用于FISH檢測。
　　 收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2008年3月至2008年10月宮頸液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本123例。其中20例為無上皮內(nèi)病變及惡性病變，103例分別做了細(xì)胞學(xué)檢查及宮頸活檢。
　　 1、液基細(xì)胞學(xué)檢測
　　 （1）標(biāo)本的處理，將刷檢標(biāo)本用傳統(tǒng)涂片方法涂2張，巴氏染色。余下部分倒入含有CytoRich保存液的小瓶中，每一體

5、積氣管鏡刷檢標(biāo)本加入CytoRich保存液；每10mL加入1mL粘液溶解液，混合后放置30min，震蕩器上震動10s，如混合液中仍有凝結(jié)，可再增加一些粘液溶解液，直至粘液溶解。
　　 （2）制片，將溶解后的標(biāo)本倒入50mL的離心管中，按2000r/min離心10min，離心后去上清，加去離子水至7.5mL，重新震蕩混勻，按上述標(biāo)準(zhǔn)再離心5 min，棄上清，震蕩離心管，放在AutoCyte機(jī)器上制片、染色。
　　 2、熒光

6、原位雜交技術(shù)（Flurescence In Situ Hybridization，F(xiàn)ISH）檢測hTERC基因的擴(kuò)增
　　 （1）收集液基瓶中的細(xì)胞制成玻片。
　　 （2）待測樣本與探針雜交。
　　 （3）熒光顯微鏡觀察并分析結(jié)果。
　　 結(jié)果：
　　 1、傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)涂片由于受粘液絲、炎性細(xì)胞及壞死細(xì)胞碎屑的干擾，204例肺癌中僅有118例發(fā)現(xiàn)了癌細(xì)胞，敏感度僅為 57.8％；而LCT法圖片背景干

7、凈、細(xì)胞圖像清晰，其敏感度達(dá)71.6％，兩者之間有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。但兩者聯(lián)合應(yīng)用，其敏感度高達(dá)76.5％。與傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　 2、hTERC基因擴(kuò)增與病變程度有關(guān)（p<0.005）。肺癌患者h(yuǎn)TERC基因擴(kuò)增的百分比明顯高于非惡性病變的患者（p<0.005）；NSCLC患者h(yuǎn)TERC基因擴(kuò)增的百分比明顯高于SCLC患者（p<0.005）。
　　 3、102例支氣管刷檢中

8、，其中使用細(xì)胞學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)84例敏感性為82.4％，而FISH檢測89人為陽性敏感性為87.3％，兩種方法無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。但在鱗癌診斷兩種方法有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）。
　　 4、hTERC基因擴(kuò)增與病變程度有關(guān)（p<0.005）。細(xì)胞學(xué)分組中HSIL及SCC患者h(yuǎn)TERC基因擴(kuò)增的百分比明顯高于LSIL、ASC-US和NILM患者（p<0.005）；組織學(xué)分組中CIN Ⅲ及SCC患者h(yuǎn)TERC基因擴(kuò)增的百分比明

9、顯高于CIN Ⅱ及以下的患者（p<0.005）。
　　 5、各種異常雜交類型與細(xì)胞學(xué)結(jié)果有關(guān)（p<0.05）。在各類異常雜交類型中2-3類型所占的百分比最高，而特殊雜交類型與細(xì)胞學(xué)結(jié)果之間的相關(guān)性最大。
　　 結(jié)論：
　　 1、應(yīng)用LCT法檢測小細(xì)胞肺癌敏感性優(yōu)于傳統(tǒng)涂片法，二者聯(lián)合檢查敏感性明顯優(yōu)于傳統(tǒng)涂片法。
　　 2、應(yīng)用FISH檢測纖支鏡刷檢液基細(xì)胞標(biāo)本中hTERC基因的表達(dá)有助于鑒別良惡性病變，