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1、氨茶堿用于治療支氣管哮喘已有50多年的歷史,其解除支氣管痙攣的作用已為臨床公認(rèn),對(duì)其作用機(jī)制的認(rèn)識(shí)在不斷深入。傳統(tǒng)認(rèn)為茶堿類(lèi)藥物抑制磷酸二脂酶活性,使細(xì)胞內(nèi)cAMP增高從而引起支氣管擴(kuò)張,而近年的研究表明氨茶堿還有廣泛的抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用。目前已有很多實(shí)驗(yàn)證實(shí)提高細(xì)胞內(nèi)cAMP水平的化合物可單獨(dú)或聯(lián)合作用誘發(fā)細(xì)胞凋亡。更有研究證實(shí)氨茶堿可以增加Jurkat和HL—60細(xì)胞的凋亡率及可促進(jìn)哮喘氣道T淋巴細(xì)胞的凋亡。因此,推測(cè)氨茶堿可能通過(guò)
2、誘導(dǎo)免疫細(xì)胞程序性死亡來(lái)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。 過(guò)去,人們一直認(rèn)為多細(xì)胞生物細(xì)胞死亡只有細(xì)胞壞死和細(xì)胞凋亡兩種,后者指細(xì)胞遵循自身的程序,自己結(jié)束其生命,最后細(xì)胞裂解為若干凋亡小體而被其它細(xì)胞吞噬。實(shí)際上凋亡只是程序性細(xì)胞死亡的方式之一,又稱(chēng)為Ⅰ型程序性細(xì)胞死亡,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)尚存在的其他細(xì)胞死亡方式,如自噬、脹亡等。自噬被稱(chēng)為Ⅱ型程序性細(xì)胞死亡,是一種胞質(zhì)降解過(guò)程,負(fù)責(zé)清除包括細(xì)胞器在內(nèi)的胞質(zhì)組分,其標(biāo)志性步驟是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)來(lái)源的分離膜包
3、裹住待降解部分形成自噬小體。有研究認(rèn)為,T淋巴細(xì)胞及其亞群通過(guò)自噬來(lái)達(dá)到免疫穩(wěn)態(tài)。而細(xì)胞脹亡是以細(xì)胞腫脹、核溶解為特征的被動(dòng)性細(xì)胞死亡。一般認(rèn)為,機(jī)體依靠凋亡方式來(lái)精確地控制組織內(nèi)細(xì)胞的數(shù)量,維持其正常結(jié)構(gòu)和形態(tài);通過(guò)脹亡來(lái)大規(guī)模清除一些過(guò)多的組織內(nèi)細(xì)胞。介導(dǎo)凋亡的死亡受體,如TNFR與其配體(TNF、FasL、抗Fas)結(jié)合后也介導(dǎo)脹亡的發(fā)生。這提示凋亡和脹亡可能還存在某些共同的信號(hào)途徑,它們的早期階段具有共同機(jī)制,脹亡可能是凋亡在某
4、種情況下不能完成其正常程序的結(jié)果。 研究目的:因而,本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)檢測(cè)氨茶堿干預(yù)后小鼠脾T淋巴細(xì)胞凋亡、自噬及脹亡的情況,分析氨茶堿對(duì)T淋巴細(xì)胞死亡方式的影響,期待為氨茶堿作用機(jī)制提供新思路。 研究方法: 1.分離10只健康小鼠脾T淋巴細(xì)胞,分對(duì)照組及氨茶堿組(4個(gè)濃度梯度組,即1mg/L、5mg/L、25mg/L、125mg/L)置37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),收集72h細(xì)胞以流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)其凋亡、自噬、
5、脹亡情況。 2.25只健康小鼠隨機(jī)分對(duì)照組及不同濃度氨茶堿組(分別為1 mg/kg、5 mg/kg、25mg/kg、125mg/kg),氨茶堿組小鼠分別予不同濃度氨茶堿灌胃、對(duì)照組予等量生理鹽水灌胃干預(yù)10天,分離小鼠脾T淋巴細(xì)胞,以流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)其凋亡、自噬、脹亡情況。 結(jié)果: 1.不同濃度梯度氨茶堿體外培養(yǎng)對(duì)小鼠脾T淋巴細(xì)胞的影響 ①125mg/L、25mg/L、5mg/L濃度氨茶堿組與陰性對(duì)照組
6、比較,差異均有顯著性,自噬率均下降,P<0.05,提示氨茶堿可誘導(dǎo)小鼠脾T淋巴細(xì)胞自噬率下降。 ②125mg/L、25mg/L、5mg/L濃度氨茶堿組T淋巴細(xì)胞凋亡率與陰性對(duì)照組比較有所升高,差異有顯著性,P<0.05,提示氨茶堿可誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡。 ③各濃度氨茶堿組T淋巴細(xì)胞脹亡率與陰性對(duì)照組比較,差異均無(wú)顯著性,P>0.05,提示氨茶堿對(duì)小鼠脾T淋巴細(xì)胞脹亡無(wú)影響。 2.不同濃度梯度氨茶堿灌胃干預(yù)對(duì)小鼠脾T
7、淋巴細(xì)胞的影響 ①各濃度氨茶堿組與陰性對(duì)照組比較,差異均有顯著性,自噬率均下降,P<0.05,提示氨茶堿可誘導(dǎo)小鼠脾T淋巴細(xì)胞自噬率下降。 ②25mg/kg濃度氨茶堿組T淋巴細(xì)胞凋亡率與陰性對(duì)照組比較有所升高,差異有顯著性,P<0.05,其余濃度組比較則無(wú)顯著差異。 ③各濃度氨茶堿組T淋巴細(xì)胞脹亡率與陰性對(duì)照組比較,差異均無(wú)顯著性,P>0.05,提示氨茶堿對(duì)小鼠脾T淋巴細(xì)胞脹亡無(wú)影響。 結(jié)論: 1
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