成牙本質(zhì)細(xì)胞層毛細(xì)淋巴管的酶組織化學(xué)及電鏡研究.pdf

1、山東醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文成牙本質(zhì)細(xì)胞層毛細(xì)淋巴管的酶組織化學(xué)及電鏡研究姓名：宮艷紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：口腔內(nèi)科指導(dǎo)教師：汪竹平20000501物量與時(shí)間的組合。3、用探索到的改良57一Nase—ALPase雙重染色法研究成牙本質(zhì)細(xì)胞層中的毛細(xì)淋巴管：取恒前磨牙2l顆，牙齒拔出后立即縱向劈開，用先固定后冰凍法處理后，制作牙髓冰凍切片。每例牙髓所得連續(xù)切片，前片HE染色，后片酶組化染色。酶組化染色分組：1)實(shí)驗(yàn)組：12例牙髓采用改良57

2、一Nase—ALPase雙重染色：2)對(duì)照組：設(shè)三組，每組各取3例牙髓。A：未改良5’一Nase—ALPase雙重染色組：B：5’一Nase單染組；C：空白組：反應(yīng)液中不加入反應(yīng)底物。染色結(jié)果用光鏡觀察。進(jìn)行透射電鏡研究時(shí)，取健康恒前磨牙15顆，拔出后立即縱向劈開，放入2j％戊二醛固定液4℃固定1小時(shí)，完整地取出牙髓，將其切成截面積約為lmmz，長(zhǎng)約3mm的小長(zhǎng)條，再放入同一固定液4℃固定2小時(shí)。后固定，包埋，半薄切片定位，選取5例牙髓

3、進(jìn)一步制作超薄切片，染色，電鏡觀察。結(jié)果：1、探索到的較為理想的標(biāo)本制備方法為先固定后冰凍法，即牙齒拔出后立即縱向劈開，2％多聚甲醛4℃固定0j小時(shí)后取出牙髓，將牙髓再放入同一固定液中4℃固定1小時(shí)，0CT包埋，液氮速凍，冷凍切片。2、ALPase反應(yīng)液中反應(yīng)底物與偶聯(lián)劑的量分別為5mg和lOmg、反應(yīng)時(shí)間為20一25分鐘時(shí)，成牙本質(zhì)細(xì)胞層能被染為不均勻的淡藍(lán)色，與其下方牙髓組織的分界清楚。=3、改良5’刈ase—ALPase雙重染色法