Ki-67甲基化寡核苷酸對(duì)腎細(xì)胞癌786-0細(xì)胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的：體外檢測(cè)Ki-67甲基化寡核苷酸對(duì)Ki-67基因表達(dá)的影響以及對(duì)腎細(xì)胞癌786-0細(xì)胞增殖及凋亡的影響。
　　 方法：用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)Ki-67甲基化寡核苷酸對(duì)Ki-67基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響；用RT-PCR和細(xì)胞免疫組織化學(xué)檢測(cè)腎細(xì)胞癌786-0細(xì)胞中Ki-67基因的表達(dá)；用WST-8檢測(cè)腎細(xì)胞癌786-0細(xì)胞增殖；用Annexin V-P1檢測(cè)腎細(xì)胞癌786-0細(xì)胞凋亡；用Western Blot檢測(cè)Bax和

2、p53蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：1． Ki-67基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性檢測(cè)結(jié)果：針對(duì)Ki-67基因核心啟動(dòng)子區(qū)(-223～+12)的5個(gè)甲基化寡核苷酸(MON1～MON5)對(duì)Ki-67啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用強(qiáng)弱依次為MON4＞MON5＞MON3＞MON2＞MON1;與對(duì)照組相比，Ki-67甲基化寡核苷酸可以顯著抑制Ki-67啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性，并且存在劑量和時(shí)間依賴性；2． RT-PCR檢測(cè)結(jié)果：Ki-67甲基化寡核苷酸組Ki-67

3、mRNA表達(dá)量顯著降低，為空白組的61.04％，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3．細(xì)胞免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果：Ki-67甲基化寡核苷酸組Ki-67蛋白表達(dá)顯著減少，為空白組的32.07％，而各對(duì)照組之間Ki-67蛋白表達(dá)沒有顯著差異：4．細(xì)胞增殖檢測(cè)結(jié)果：于細(xì)胞轉(zhuǎn)染后第24h、48h、72h和96h檢測(cè)細(xì)胞的OD值，結(jié)果顯示Ki-67甲基化寡核苷酸組腎細(xì)胞癌786-0細(xì)胞增殖率分別降至空白組的61.02％、73.78％、79.72％、91

4、.25％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；5．細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果：分別于細(xì)胞轉(zhuǎn)染24h和48h檢測(cè)腎細(xì)胞癌786-0細(xì)胞早期凋亡和晚期凋亡，結(jié)果顯示Ki-67甲基化寡核苷酸組早期凋亡和晚期凋亡細(xì)胞數(shù)目分別為空白組的2.42倍和2.57倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；6.Western Blot檢測(cè)結(jié)果：Ki-67甲基化寡核苷酸組Bax蛋白表達(dá)量比空白組增加了66.12％、p53蛋白表達(dá)量降至空白組的67.31％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：Ki-67