Ki-67甲基化寡核苷酸對腎細胞癌786-0細胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的：體外檢測Ki-67甲基化寡核苷酸對Ki-67基因表達的影響以及對腎細胞癌786-0細胞增殖及凋亡的影響。
　　 方法：用雙熒光素酶報告基因檢測Ki-67甲基化寡核苷酸對Ki-67基因啟動子轉(zhuǎn)錄活性的影響；用RT-PCR和細胞免疫組織化學檢測腎細胞癌786-0細胞中Ki-67基因的表達；用WST-8檢測腎細胞癌786-0細胞增殖；用Annexin V-P1檢測腎細胞癌786-0細胞凋亡；用Western Blot檢測Bax和

2、p53蛋白的表達。
　　 結(jié)果：1． Ki-67基因啟動子轉(zhuǎn)錄活性檢測結(jié)果：針對Ki-67基因核心啟動子區(qū)(-223～+12)的5個甲基化寡核苷酸(MON1～MON5)對Ki-67啟動子轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用強弱依次為MON4＞MON5＞MON3＞MON2＞MON1;與對照組相比，Ki-67甲基化寡核苷酸可以顯著抑制Ki-67啟動子轉(zhuǎn)錄活性，并且存在劑量和時間依賴性；2． RT-PCR檢測結(jié)果：Ki-67甲基化寡核苷酸組Ki-67

3、mRNA表達量顯著降低，為空白組的61.04％，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義；3．細胞免疫組織化學檢測結(jié)果：Ki-67甲基化寡核苷酸組Ki-67蛋白表達顯著減少，為空白組的32.07％，而各對照組之間Ki-67蛋白表達沒有顯著差異：4．細胞增殖檢測結(jié)果：于細胞轉(zhuǎn)染后第24h、48h、72h和96h檢測細胞的OD值，結(jié)果顯示Ki-67甲基化寡核苷酸組腎細胞癌786-0細胞增殖率分別降至空白組的61.02％、73.78％、79.72％、91

4、.25％，差異有統(tǒng)計學意義；5．細胞凋亡檢測結(jié)果：分別于細胞轉(zhuǎn)染24h和48h檢測腎細胞癌786-0細胞早期凋亡和晚期凋亡，結(jié)果顯示Ki-67甲基化寡核苷酸組早期凋亡和晚期凋亡細胞數(shù)目分別為空白組的2.42倍和2.57倍，差異有統(tǒng)計學意義；6.Western Blot檢測結(jié)果：Ki-67甲基化寡核苷酸組Bax蛋白表達量比空白組增加了66.12％、p53蛋白表達量降至空白組的67.31％，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論：Ki-67