大鼠乳腺癌MRI靶向造影劑的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：利用單克隆抗體LM609與釓雙胺制備抗體造影劑，并制備大鼠乳腺癌腫瘤模型，在MRI掃描機(jī)下觀察所制備的造影劑在大鼠乳腺癌模型中的靶向性。 方法：無(wú)菌條件下，取一定量的單克隆抗體LM609(1×10-3mg/mL)，按合理比例，加入適量的釓雙胺溶液(濃度為0.093ug/ml)，室溫下反應(yīng)12小時(shí)，形成復(fù)合物，將復(fù)合物移入透析袋(截留分子量8000)，用NaHCO3液透析24小時(shí)，除去游離的釓雙胺等。取四只干凈試管，向試管中

2、加入不同濃度比的抗體與釓雙胺連好的復(fù)合物，在磁共振掃描機(jī)下掃描，TR 300毫秒，TE 20毫秒，成像視野FOV為100mm×100mm，層厚：2毫米，矩陣256×256。每只試管分別做四次掃描，每次掃描采集次數(shù)分別為5次、10次、20次、40次。記錄所測(cè)得的信號(hào)值，通過(guò)信號(hào)的顯影強(qiáng)程度判斷單克隆抗體LM609與釓雙胺的連接情況以及抗體的免疫活性。無(wú)菌環(huán)境、適宜溫度下，培養(yǎng)清潔級(jí)SD大鼠15只，雌性，均為200克左右，每只大鼠皮下注射大

3、鼠乳腺癌細(xì)胞1×107個(gè)/ml約1ml，隨觀察瘤體生長(zhǎng)情況，待2周左右瘤體生成后，將成瘤鼠隨機(jī)分為三組并編號(hào)，實(shí)驗(yàn)組為10只，分為A、B兩組，對(duì)照組C組為5只；掃描前先將大鼠麻醉，于腹腔內(nèi)注射適量氯胺酮，約半小時(shí)后將大鼠仰臥位置于臺(tái)架上并固定，然后于頸部剝離頸靜脈，留置針插入。實(shí)驗(yàn)組兩組均經(jīng)大鼠頸靜脈注射不同濃度的單克隆抗體造影劑，對(duì)照組注射與前者相同濃度的普通造影劑釓雙胺以備掃描。在MRI下用頭部線圈進(jìn)行不同時(shí)刻掃描，觀察其不同時(shí)刻瘤

4、體的信號(hào)情況及代謝情況：Siemens 1.5 T MRI掃描機(jī)T1加權(quán)冠狀位及橫斷面掃描，TR300毫秒，TE20毫秒，翻轉(zhuǎn)角為FGR/30°，成像視野為120mm×120mm，層厚：2毫米，矩陣256×160。每個(gè)瘤體ROI值測(cè)定：每只大鼠瘤體上選擇3各興趣區(qū)，測(cè)其ROI值，然后計(jì)算其平均值。平掃及注射造影劑后每個(gè)時(shí)間點(diǎn)所選的興趣區(qū)位置及大小盡量保持一致，分別于注射造影劑前、注射造影劑即刻，6小時(shí)，12小時(shí)，24小時(shí)，36小時(shí)，48

5、小時(shí)不同時(shí)刻測(cè)量注射不同濃度對(duì)比劑瘤體的信號(hào)強(qiáng)度；最后，將實(shí)驗(yàn)用大鼠處死，切除瘤體取標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋固定，并作蘇木素-伊紅(HE)染色，觀察其瘤體內(nèi)部結(jié)構(gòu)及分析結(jié)構(gòu)對(duì)信號(hào)的影響。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行多個(gè)數(shù)據(jù)方差分析，再進(jìn)行兩兩比較t檢驗(yàn)，以P<0.05為顯著性意義。 結(jié)果： 1.四只裝有不同單克隆抗體與釓雙胺濃度比的試管在MRI掃描分別進(jìn)行四次采集(每次采集次數(shù)分別為5次、10次、20次、40次)

6、，對(duì)所測(cè)得信號(hào)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出： 1.1不同濃度比的四只試管信號(hào)值差異有統(tǒng)學(xué)意義。 1.2不同濃度比的四只試管所測(cè)信號(hào)值平均值依次為Mean=85.25，98.51，128.25，156.00結(jié)果顯示：?jiǎn)慰寺】贵w與釓雙胺的濃度比越大，所測(cè)得信號(hào)值越高，說(shuō)明此時(shí)抗體與釓離子確實(shí)連接在一起，并且在一定濃度內(nèi)抗體的活性保持良好。 2.所有大鼠在MRI下進(jìn)行不同時(shí)刻掃描，對(duì)所得三組測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出：

7、 2.1.1實(shí)驗(yàn)A組各掃描時(shí)間點(diǎn)之間瘤體信號(hào)值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.1.2實(shí)驗(yàn)A組增強(qiáng)后各掃描時(shí)間點(diǎn)與平掃瘤體信號(hào)值比較(各時(shí)間點(diǎn)的比較順序?yàn)椋浩綊摺?0min，平掃、6h，平掃、12h，平掃、24h，平掃、36h，平掃、48h，共組六組，結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組A組瘤體在注射造影劑后6小時(shí)瘤體信號(hào)增加與平掃比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.1.3實(shí)驗(yàn)A組增強(qiáng)后瘤體各時(shí)間點(diǎn)信號(hào)平均值為Mean=288.61，335.62，344.6

8、2，462.42，415.23，384.24其中在24小時(shí)掃描值最高，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)A組瘤體在注射造影劑后24小時(shí)后信號(hào)達(dá)到最高。 2.2.1實(shí)驗(yàn)組B各掃描時(shí)間點(diǎn)之間瘤體信號(hào)值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.2.2實(shí)驗(yàn)B組增強(qiáng)后各掃描時(shí)間點(diǎn)與平掃瘤體信號(hào)值比較,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)B組瘤體在注射造影劑后6小時(shí)瘤體信號(hào)增加與平掃比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.2.3實(shí)驗(yàn)B組增強(qiáng)后瘤體各時(shí)間點(diǎn)信號(hào)平均值為Mean=268.60，347.81，39

9、9.64，482.63，421.82，386.64其中在24小時(shí)掃描值最高，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)B組瘤體在注射造影劑后24小時(shí)后信號(hào)達(dá)到最高。 2.3.1對(duì)照組C組各掃描時(shí)間點(diǎn)之間瘤體信號(hào)值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.3.2對(duì)照C組增強(qiáng)后各掃描時(shí)間點(diǎn)與平掃瘤體信號(hào)值比較,結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)C組瘤體注射釓雙胺后10分鐘、6小時(shí)內(nèi)信號(hào)增加與平掃比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，12小時(shí)以后無(wú)明顯差異。 2.3.3實(shí)驗(yàn)C組增強(qiáng)后瘤體的信號(hào)平均值為Mean

10、=828.40，415.21，256.22，256.81，252.62，250.84其中在10分鐘掃描值最高，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)C組瘤體在注射普通造影劑后即刻便可達(dá)到高峰，而隨時(shí)間推遲，造影劑逐漸排泄，信號(hào)逐漸降低。 結(jié)論： 1.體外表征的測(cè)定：裝有不同單克隆抗體與釓雙胺濃度比的四只試管所測(cè)得信號(hào)值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=89.41)，說(shuō)明抗體與釓離子確實(shí)連接。 2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，實(shí)驗(yàn)AB兩組大鼠注射單克隆造影劑6小時(shí)后瘤體強(qiáng)化

11、信號(hào)值逐漸提高，在約24小時(shí)后腫瘤的強(qiáng)化值達(dá)到了最高。在48小時(shí)后瘤體仍有輕度不均勻強(qiáng)化，雖然強(qiáng)化信號(hào)較以前降低，但比平掃時(shí)仍呈稍高信號(hào)強(qiáng)化，且增強(qiáng)后各時(shí)間點(diǎn)信號(hào)強(qiáng)度有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而對(duì)照組C組內(nèi)，瘤體則表現(xiàn)為造影劑快進(jìn)快出的方式，在10分鐘時(shí)瘤體即達(dá)到最高強(qiáng)化且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而12小以后內(nèi)瘤體信號(hào)明顯下降，基本平掃時(shí)無(wú)差異。實(shí)驗(yàn)說(shuō)明所制備的單克隆抗體造影劑相比普通造影劑在瘤體強(qiáng)化的時(shí)間上有顯著性差異，從而進(jìn)一步證明單克隆抗體造影劑可以對(duì)