人鼠嵌合抗腫瘤細(xì)胞核單抗-空間穩(wěn)定脂質(zhì)體研究.pdf

1、該文首先從普通和穩(wěn)定性脂質(zhì)體膜材料制備出發(fā),制備了蛋白黃卵磷脂(EPC)、氫化卵磷脂(HEPC)、甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺或氫化磷脂酰乙醇胺(MPEG-EPE或MPEG-HEPE)以及抗體與脂質(zhì)體的橋連劑—吡啶二硫丙?；?聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺或氫化磷脂酰乙醇胺(PDP-PEG-EPE或PDP-PEG-HEPE)及其中間體單氨基聚乙二醇(PEG-NH<,2>).TLC、IR、HNMR證實(shí)所制備的膜材料均符合實(shí)驗(yàn)要求.空間穩(wěn)定免疫脂質(zhì)

2、體(chTNT-SLs或IgG-SLs)的制備是采用高壓乳勻法先制備出含PDP-PEG-EPE的空間穩(wěn)定脂質(zhì)體(PDP-SLs),再通過(guò)二硫蘇糖醇(DTT)將其還原來(lái)表面帶巰基的SLs(HS-SLs),最后與衍生化后的抗體連接即得,其粒徑分布均勻,平均粒徑約為140nm,稍大于修飾前粒徑.包載阿霉素(DOX)則在制得PDP-SLs后進(jìn)行,繼后再連接抗體.采用硫酸胺梯度法包載DOX時(shí),膜組成為EPC/Chol/MPEG-EPE或再加PDP

3、-PEG-EPE的脂質(zhì)體,包載條件以50℃、30min為優(yōu);膜組成為HEPC/Chol/MPEG-HEPE或再加PDP-PEG-HEPE的脂質(zhì)體,包載條件65℃、30min為優(yōu),且藥脂比為1:5時(shí),包封率可達(dá)95﹪以上.空間穩(wěn)定免疫脂質(zhì)體的免疫活性是決定其能否主動(dòng)靶向的關(guān)鍵.<'125>I標(biāo)記法的檢測(cè)結(jié)果表明:抗體連接效率為53.72﹪,脂質(zhì)體表面抗體密度為75.23μg Ab/μmol磷脂,處于較優(yōu)的抗體密度范圍內(nèi);chTNT和chT

4、NT-SLs與Raji細(xì)胞的特異性結(jié)合率均約為5﹪,與其核抗原結(jié)合率約15﹪;chTNT、chTNT-SLs均能與<'125>I-chTNT競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合Raji細(xì)胞核抗原,提示二者均有相同的免疫結(jié)合位點(diǎn).空間穩(wěn)定免疫脂質(zhì)體的粒徑及所包載DOX的膜泄漏穩(wěn)定性決定著其在體內(nèi)的生物學(xué)行為,在血循環(huán)中滯留時(shí)間長(zhǎng)短是決定其能否靶向?qū)嶓w瘤組織的關(guān)鍵.放置過(guò)程中粒徑變化結(jié)果提示,空間穩(wěn)定免疫脂質(zhì)體的穩(wěn)定性介于普通脂質(zhì)體和空間穩(wěn)定脂質(zhì)體之間;DOX-SL-

5、IgG在37℃的PBS和1﹪人血漿中振蕩放置10h藥物泄漏或釋放率分別為20.7﹪和9.5﹪,提示DOX空間穩(wěn)定免疫脂質(zhì)體膜阻止DOX泄漏性能較好;<'125>I標(biāo)記chTNT-CLs和chTNT-SLs在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明,后者在血液中清除慢,滯留時(shí)間比前者長(zhǎng).HPLC-熒光檢測(cè)法測(cè)定DOX-SLs、DOX-SL-IgG和DOX在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的結(jié)果表明,藥動(dòng)學(xué)行為均符合兩室模型,但DOX脂質(zhì)體的t<,1/2>均比DOX長(zhǎng)得多

6、,提示DOX空間穩(wěn)定免疫脂質(zhì)體具有血液長(zhǎng)循環(huán)特性.空間穩(wěn)定免疫脂質(zhì)體在實(shí)體瘤組織積聚程度是其能否發(fā)揮療效的基礎(chǔ),影像學(xué)定位是了解其在靶位動(dòng)態(tài)積聚程度和速度的一種較為直觀的方法.將磁共振用順磁性顯像劑的主藥成分釓噴酸復(fù)合物(Gd-DTPA)包載于脂質(zhì)體中,制備成Gd-SL-chTNT.通過(guò)對(duì)給藥后不同時(shí)相點(diǎn)的荷SKOV3瘤裸鼠進(jìn)行磁共振增強(qiáng)掃描,結(jié)果表明,Gd-SL-chTNT在瘤體部位強(qiáng)化特征不同于游離Gd-DTPA,表面為12h和24