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文檔簡介
1、目的:觀察半胱氨酰白三烯(CysLT)受體(CysLT1R和CysLT2R)對小鼠BV2小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬功能的調(diào)節(jié)作用,并初步探討CysLT受體兩種亞型之間是否存在相互作用。
方法:
1.采用CysLT受體激動劑(LTD4和NMLTC4)和小膠質(zhì)細(xì)胞激活劑(LPS和IFN-γ)作用一定時間,以免疫熒光法和流式細(xì)胞術(shù)檢測BV2細(xì)胞吞噬功能的變化。
2.CysLT1R選擇性拮抗劑montelukast和CysLT
2、2R選擇性拮抗劑HAMI3379預(yù)處理30 min后,檢測對激動劑或激活劑引起的吞噬功能變化的作用。
3.以Western blotting法檢測LPS和IFN-γ引起的CysLT1R及CysLT2R表達(dá)的變化,以及montelukast和HAMI3379對LPS引起的表達(dá)變化的影響。
4.以免疫熒光共染法檢測CysLT受體激動劑LTD4和NMLTC4以及LPS是否引起CysLT1R和CysLT2R分布的變化;在確定
3、的作用時間點(diǎn),用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行初步驗(yàn)證。
結(jié)果:
1.免疫熒光法和流式細(xì)胞術(shù)都表明,CysLTs受體激動劑LTD4和NMLTC4以及小膠質(zhì)細(xì)胞激活劑LPS和IFN-γ,均增強(qiáng)BV2細(xì)胞吞噬功能。
2.Montelukast和HAMI3379能對抗BV2細(xì)胞吞噬功能的增強(qiáng)。Montelukast(0.1μmol/L)和HAMI3379(1μmol/L)均顯著抑制LTD4誘導(dǎo)的吞噬增強(qiáng);monteluka
4、st(0.1-1μmol/L)和HAMI3379(1μmol/L)均明顯抑制NMLTC4誘導(dǎo)的吞噬增強(qiáng),且montelukast作用強(qiáng)于HAMI3379。Montelukast和HAMI3379(1μmol/L)均顯著抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活劑LPS誘導(dǎo)的吞噬增強(qiáng)。
3.LPS和IFN-γ均上調(diào)BV2細(xì)胞的CysLT1R和CysLT2R表達(dá),其中,IFN-γ使CysLT1R表達(dá)僅有增加趨勢,而CysLT2R表達(dá)明顯增加;LPS顯著增
5、加CysLT1R和CysLT2R的表達(dá),且該作用能被montelukast和HAMI3379所拮抗。
4.BV2細(xì)胞激活導(dǎo)致CysLT1R和CysLT2R分布的變化,CysLT1R與CysLT2R存在共定位,激活后發(fā)生內(nèi)移的特點(diǎn)與時間基本一致。
結(jié)論:
1.CysLT1R和CysLT2R共同參與BV2細(xì)胞激活的調(diào)節(jié),表現(xiàn)為細(xì)胞吞噬功能增強(qiáng)以及CysLT1R和CysLT2R表達(dá)增加,特異性拮抗劑使用后上述現(xiàn)象
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