重鉻酸鉀對(duì)人肺上皮細(xì)胞hOGG1及hMTH1基因表達(dá)的影響.pdf

1、惡性腫瘤是危害人類健康的嚴(yán)重疾病之一，近年來(lái)其發(fā)病率與死亡率均呈上升趨勢(shì)。我國(guó)每年癌癥發(fā)病人數(shù)約達(dá)170萬(wàn)，每年因癌癥死亡的人數(shù)達(dá)150萬(wàn)，已經(jīng)超過(guò)心腦血管疾病成為致死原因的第1位。 肺癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。其在我國(guó)國(guó)內(nèi)為十大癌癥死亡原因之一，且呈逐年增加的趨勢(shì)。研究表明六價(jià)鉻化合物是一種對(duì)人類有致癌性的物質(zhì)，它可經(jīng)經(jīng)呼吸道進(jìn)入并沉積于肺臟，肺臟是其引起組織損傷和致癌的主要靶器官。流行病學(xué)研究結(jié)果表明職業(yè)性鉻暴露與職業(yè)

2、性肺癌有密切關(guān)系，六價(jià)鉻化合物已被國(guó)際癌癥研究中心(International．Agency for Research on Cancer，IARC)明確為人類致癌物(IARC1990資料)． 肺癌發(fā)病的主要機(jī)制是各種致癌物通過(guò)不同的方式誘發(fā)呼吸道上皮細(xì)胞DNA的損傷，導(dǎo)致一些相關(guān)基因的變化，從而導(dǎo)致細(xì)胞遺傳信息的改變，細(xì)胞轉(zhuǎn)化和癌變。鉻酸鹽致癌的詳細(xì)機(jī)理目前尚不清楚，DNA的損傷和修復(fù)，在細(xì)胞癌變的過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用；有資料

3、顯示，鉻能產(chǎn)生低劑量興奮效應(yīng)(hormesis)現(xiàn)象。所謂hormesis現(xiàn)象，即任何作用因子當(dāng)以低于有害劑量作用于生物機(jī)體時(shí)，會(huì)產(chǎn)生某種興奮作用，表現(xiàn)為促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育、延長(zhǎng)壽命，也可以增強(qiáng)防御能力及其對(duì)損傷的修復(fù)。低劑量興奮效應(yīng)的作用機(jī)制目前不太清楚，有學(xué)者認(rèn)為低劑量作用因子可增加修復(fù)能力，與修復(fù)基因的表達(dá)有密切關(guān)系。研究顯示，堿基切除修復(fù)(Base Excision Repair,BER)是哺乳動(dòng)物切除少量已遭破壞的核苷的主要方法

4、，故作為修復(fù)基因的人8-羥基脫氧鳥(niǎo)嘌呤糖苷酶(human 8-hydroxyguanine glycosylase，hOGGl)基因和人MutT。同源物(1tlumanMutT homologue，hMTHl)基因亦越來(lái)越受到人們的重視，故本研究用人肺上皮細(xì)胞A549細(xì)胞作為研究對(duì)象，研究重鉻酸鉀的低劑量興奮效應(yīng)對(duì)人肺上皮細(xì)胞A549細(xì)胞增殖的影響及其對(duì)hOGG1和hMTH1 mRNA的表達(dá)的影響，為以后的更深一步探討六價(jià)鉻致癌機(jī)制提供

5、試驗(yàn)基礎(chǔ)。 材料和方法： 1．細(xì)胞選用人肺上皮細(xì)胞A549，刺激物為重鉻酸鉀，其作用濃度分別為0.15μmol/L，0.312μmol/L,0.625μmol/L，1,25μmol/L，2.5μmol/L，5μmol/L。對(duì)照組的重鉻酸鉀濃度為0μmol/L。 2．形態(tài)學(xué)觀察：以上各組在做噻唑蘭(MTT)比色法測(cè)細(xì)胞抑制率試驗(yàn)之前，在倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)板內(nèi)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況及形態(tài)學(xué)改變并且照相。 3． MT

6、I比色法測(cè)重鉻酸鉀刺激細(xì)胞后細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。 4．以．8-actin基因?yàn)閰⒄?，采用半定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)以上濃度的重鉻酸鉀作用細(xì)胞24h后hOGGl和hMTHl基因在mRNA水平上的表達(dá)。 5．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析運(yùn)用SAS9.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，MTr結(jié)果各組之間的均數(shù)的比較以及兩種基因mRNA水平的表達(dá)結(jié)果的比較用單因素方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果1．對(duì)細(xì)胞增殖的影響濃度組為0.156μmol/L和0.312μ

7、mol/L的重鉻酸鉀能促進(jìn)細(xì)胞的增殖，濃度組為0.625μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L和5.000μmol/L的重鉻酸鉀能抑制細(xì)胞的增殖，各組的生長(zhǎng)抑制率與對(duì)照組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2．hOGGl和hMTI-11在mRNA上的表達(dá)結(jié)果濃度組為0.156＃mol/L和0.312μmol/L的重鉻酸鉀可促進(jìn)hOGGl及hMTHlmRNA的表達(dá)，濃度組為0.625gmol/L、1.25kzmol/