牙鲆胚胎的玻璃化冷凍保存的研究.pdf

1、本文以牙鲆胚胎為材料，研究了麥管直徑、平衡溫度、裝卵個(gè)數(shù)等影響?hù)~(yú)類(lèi)胚胎玻璃化冷凍保存的幾個(gè)方面的內(nèi)容。對(duì)牙鲆胚胎的玻璃化冷凍保存方法和條件進(jìn)行了優(yōu)化，特別對(duì)玻璃化液組成進(jìn)行了改良，對(duì)胚胎發(fā)育時(shí)期和平衡時(shí)間進(jìn)行了篩選，對(duì)胚胎的冷敏感性和冷凍損傷機(jī)理進(jìn)行了探討。 結(jié)果表明：含有多種抗凍劑的玻璃化液PMDD(2％PVP)，玻璃化穩(wěn)定，脫玻璃化率較低，適宜進(jìn)行玻璃化冷凍。在胚胎發(fā)育過(guò)程中，牙鲆各期胚胎對(duì)玻璃化液的適應(yīng)能力不同，尾芽期胚胎

2、較其他時(shí)期耐受力強(qiáng)。凍前平衡時(shí)間跟牙鲆胚胎的質(zhì)量有密切的關(guān)系，一般情況下，在玻璃化液PMDD(2％PVP)中平衡40min就足以使玻璃化液滲透完全；時(shí)間延長(zhǎng)，成活率顯著降低。牙鲆胚胎在0℃與4℃下平衡的成活率顯著高于15℃。非滲透性抗凍劑PVP、Ficoll可以增強(qiáng)玻璃化液的穩(wěn)定性，降低脫玻璃化率。牙鲆胚胎具有高的冷敏感性，溫度降到0℃以下，成活率顯著降低；這種冷敏感性隨胚胎發(fā)育階段而變化，發(fā)育后期的胚胎比發(fā)育早期的胚胎顯示出了對(duì)低溫更

3、高的耐受力。在三種規(guī)格的麥管中，直徑為2.5mm的麥管脫玻璃化率最低，適宜進(jìn)行玻璃化冷凍保存的研究；在1個(gè)直徑2.5m的麥管中裝入2-5粒牙鲆胚胎，脫玻璃化率的改變無(wú)顯著差異。牙鲆胚胎的凍前平衡過(guò)程及洗脫過(guò)程的顯微觀察表明，抗凍劑向胚胎滲透的最大障礙是卵黃囊；牙鲆胚胎在進(jìn)行玻璃化冷凍保存時(shí)，卵黃囊是極易受損傷的部位。 根據(jù)優(yōu)化的條件，對(duì)牙鲆兩個(gè)時(shí)期的胚胎進(jìn)行超低溫冷凍保存實(shí)驗(yàn)，共成活4次，獲得成活胚胎8粒，其中7粒孵化出健康的魚(yú)