小麥遺傳轉(zhuǎn)化參數(shù)優(yōu)化及其應(yīng)用研究.pdf

1、本文以中國春性小麥新品種(系)為外植體，進(jìn)行組織培養(yǎng)和遺傳轉(zhuǎn)化參數(shù)研究。在此基礎(chǔ)上，將含有bar基因和GUS報告基因的質(zhì)粒pDM803用基因槍法轉(zhuǎn)化小麥，獲得可育的轉(zhuǎn)基因小麥植株，從而建立了適于中國春性小麥基因型的基因槍轉(zhuǎn)化體系。主要研究結(jié)果如下：　　1.首次報道2，4，5-T和NAA對小麥愈傷組織培養(yǎng)反應(yīng)的影響，特別是詳細(xì)比較了它們與小麥組織培養(yǎng)試驗(yàn)中廣泛應(yīng)用的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)2，4-D之間的差異?！　?.小麥幼胚愈傷組織分化頻率(6

2、2％-76.39％)高于成熟胚愈傷組織分化頻率(38.57％-47.76％)。對小麥愈傷組織進(jìn)行干燥處理，適宜時間內(nèi)可有效地提高外植體分化頻率?！　?.首次探討在培養(yǎng)基中添加AgNO3對普通小麥幼胚愈傷組織培養(yǎng)的影響。在培養(yǎng)基中添加適宜濃度硝酸銀可顯著提高胚性愈傷組織率和愈傷鮮重，且能降低愈傷組織褐化率。 4.抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，頭孢霉素對小麥愈傷組織的毒性比羧芐青霉素大。 5.根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果建立了一套適宜于中國春性小麥基

3、因槍轉(zhuǎn)化程序，使外源DNA能有效地轉(zhuǎn)移到受體中，同時減少轉(zhuǎn)化中對愈傷組織的機(jī)械損傷。試驗(yàn)共獲得429塊川農(nóng)16抗性愈傷組織，59株再生植株。經(jīng)PAT活性檢測，獲得13株抗除草劑或半抗性植株，PCR分析檢測到其中6株具有bar基因陽性預(yù)期片段，轉(zhuǎn)化效率達(dá)1.40％。 6.以成熟種子為材料進(jìn)行了Basta抗性梯度試驗(yàn)。隨Basta濃度增加，小麥幼苗生長受到抑制，高度明顯降低，黃化率顯著增大。Basta濃度為9mg/L的處理適宜，播種后