雙酚A對F344大鼠甲狀腺組織雌激素受體α表達的影響.pdf

1、甲狀腺癌是內分泌系統中最常見的惡性腫瘤。甲狀腺局部乳頭狀增生以及C細胞增生等局部增生性病變具有轉化為良、惡性腫瘤的潛能，在甲狀腺細胞異常增殖中十分常見。近年來，甲狀腺乳頭狀癌（Papillary thyroid carcinoma，PTC）發(fā)病率在世界范圍內呈上升趨勢，部分碘過量地區(qū)PTC發(fā)病率增高。育齡期人群PTC患病率的女性與男性之比為3～5∶1。乳腺癌患者伴發(fā)甲狀腺癌的概率明顯增高。乳腺癌的發(fā)生與雌激素和雌激素受體α（Estrog

2、en receptorα，ERα）密切相關。細胞學實驗發(fā)現，甲狀腺腫瘤細胞的增殖與ERα也具有密切聯系。環(huán)境內分泌干擾物雙酚A(Bisphenol A，BPA)是一種雌激素類似物，可作用于ERα，導致乳腺、卵巢等器官組織的增生性病變甚至癌變。但BPA如何影響甲狀腺增生性病變的發(fā)生以及與甲狀腺ERα表達的關系尚不明確。我們前期體外研究發(fā)現10-8～10-6mmol/L BPA可顯著促進人PTC細胞增殖;前期動物實驗表明，在碘過量基礎上，B

3、PA250組F344大鼠甲狀腺腫瘤發(fā)病率最高，BPA1000組甲狀腺腫瘤惡性度最高。
　　目的：
　　在碘過量基礎上，研究BPA對F344大鼠甲狀腺局部增生性病變發(fā)生的影響以及對甲狀腺組織ERα表達的影響，探討B(tài)PA促進甲狀腺組織增生的部分作用機制，為甲狀腺腫瘤的預防以及BPA相關產品的合理使用提供一定的科學依據。
　　方法：
　　4周齡雌性F344大鼠，按2800mg/kg體質量一次性皮下注射致癌藥物N-亞硝基

4、二異丙醇胺(N-Bis(2-hydroxypropyl) nitrosamine，DHPN)。將大鼠隨機分為對照組、碘化鉀(Potassium iodide，KI)1000μg/L組（KI組）、BPA250μg/kg+KI1000μg/L組（BPA250+KI組）和BPA1000μg/kg+KI1000μg/L組(BPA1000+KI組)，共4組，每組10只。64周后，測定KI組和對照組24h尿碘濃度，統計各組甲狀腺局部增生性病變的病理

5、類型和發(fā)生率，檢測ERα的免疫學表達和蛋白表達量，分析ERα和增殖指標PCNA的表達相關性及表達定位，測定血清雌二醇(Estradiol，E2)濃度。計量資料以(x)±s表示，組間比較方差齊時采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗或t檢驗，方差不齊時采用非參數檢驗。計數資料分析采用Fisher確切概率法。大鼠甲狀腺ERα與PCNA免疫學表達相關性及血清E2濃度與甲狀腺ERα免疫學表達相關性采用Spearman相關性分析。P＜0.05

6、為差異具有統計學意義。
　　結果：
　　1.大鼠24h尿碘濃度
　　KI組大鼠24h尿碘中位數（Median of urinary iodine，MUI）(320.36μg/L)達到碘過量標準，與對照組(88.21μg/L)相比差異具有統計學意義(P＜0.01)。KI組24h尿碘平均值(311.84±19.22μg/L)與對照組（90.50±18.83μg/L）相比具有顯著性差異(P＜0.001)。
　　2.大鼠

7、甲狀腺局部增生性病變病理類型
　　各組均出現不同程度局部增生性病變，包括C細胞增生和局部乳頭狀增生，其中局部乳頭狀增生又分為3級。
　　本實驗中，對照組出現2例局部增生性病變，均為Ⅰ級乳頭;KI組出現7例，包括1例C細胞增生，3例Ⅰ級乳頭，2例Ⅱ級乳頭和1例Ⅲ級乳頭;BPA250+KI組出現3例局部增生性病變，分別為2例Ⅱ級乳頭和1例Ⅲ級乳頭;BPA1000+KI組出現8例局部增生性病變，分別為1例C細胞增生合并Ⅰ級乳頭，3

8、例Ⅰ級乳頭，2例Ⅱ級乳頭和2例Ⅲ級乳頭。
　　3.大鼠甲狀腺增生性病變發(fā)生率
　　3.1局部增生性病變發(fā)生率組間相比有顯著性差異(P＜0.05)。BPA1000+KI組局部增生性病變發(fā)生率最高(80.00％)，對照組最低(22.22％)，兩兩相比無顯著差異。
　　3.2增生性病變（含腫瘤及局部增生性病變）總體發(fā)生率組間相比差異有統計學意義(P＜0.05)。兩兩比較，BPA1000+KI組(100％)較對照組(33.33

9、％)顯著增高（P＜0.01）。
　　4.大鼠甲狀腺ERα免疫組化結果
　　4.1大鼠甲狀腺ERα免疫組化陽性率組間相比差異無統計學意義(P＞0.05)。陽性率最高者為BPA1000+KI組和BPA250+KI組(均為88.89％)，對照組陽性率最低(42.86％)。
　　4.2大鼠甲狀腺ERα免疫組化評分組間相比具有統計學差異(P＜0.05)。兩兩比較發(fā)現，BPA1000+KI組評分最高，其次是BPA250+KI組，均

10、較對照組明顯增高（P＜0.01;P＜0.05）。此外，BPA1000+KI組ERα評分較KI組顯著增高(P＜0.05)。
　　5.大鼠甲狀腺ERα蛋白Western blot結果
　　組間相比有統計學差異(P＜0.01)。BPA1000+KI組ERα表達水平最高，其次為BPA250+KI組，該兩組與對照組相比均有顯著性增高(P＜0.01;P＜0.01)。KI組ERα表達水平與對照組無明顯差別（P＞0.05）。BPA1000+

11、KI組及BPA250+KI組與KI組相比均顯著升高(P＜0.01; P＜0.05)。
　　6.大鼠甲狀腺ERα及PCNA免疫學表達的相關性
　　Spearman相關性分析顯示，兩者在甲狀腺的免疫學表達呈正相關關系且具有統計學意義（n=27,r=0.504,P=0.004）（忽略分組影響）。
　　7.大鼠甲狀腺ERα及PCNA的免疫學表達定位
　　7.1 ERα及PCNA在甲狀腺增生性病變中的表達定位ERα在甲狀腺

12、腫瘤和局部增生性病變中均可陽性表達。當病變部位ERα陽性時，周圍正常甲狀腺組織ERα表達量呈弱陽性或陰性表達。在高度惡性的MTC和ATC中，ERα呈彌漫性陽性表達。PCNA表達部位與ERα基本一致。
　　7.2 ERα及PCNA在正常甲狀腺組織中的表達定位在正常甲狀腺濾泡組織中，ERα與PCNA均主要分布于立方樣或高柱狀濾泡細胞，同時伴有濾泡腔直徑較小及腔內膠質含量稀薄。在周邊相對扁平、較大直徑濾泡腔和含有豐富膠質的甲狀腺細胞，E

13、Rα及PCNA分布減少。
　　8.大鼠血清E2濃度與甲狀腺ERα表達的相關性
　　四組血清E2濃度組間相比無顯著性差異(P＞0.05)。Spearman相關性分析顯示，大鼠血清E2濃度與相應甲狀腺ERα免疫組化評分之間無顯著相關性(n=22,r=0.013,P=0.956)（忽略分組）。
　　結論：
　　1.在DHPN基礎上，碘過量未能顯著升高F344大鼠甲狀腺增生性病變的發(fā)生率。
　　2.在DHPN及碘過